[發明專利]一種食品病原菌致瀉大腸埃希氏菌快速檢測試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202011553110.2
• 申請日: 2020-12-24
• 公開（公告）號: CN112481400A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 楊秀清;任帥偉
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/10;C12N15/11;C12R1/19
• 代理公司: 太原申立德知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14115
• 代理人: 郭海燕

本發明屬于生物技術、食品檢測領域，具體是一種食品病原菌致瀉大腸埃希氏菌快速檢測試劑盒及方法。為建立一種高效、快速、準確且經濟的檢測方法，本發明公開了一種基于PCR?DGGE檢測食品病原菌致瀉大腸埃希氏菌的試劑盒，包括引物組、DNA片段，PCR緩沖液，STE緩沖液。檢測方法具體是以化學合成的食品病原菌致瀉大腸埃希氏菌的DNA片段作為待測樣品的標準參考，當樣品條帶與標準條帶處于相同位置時，即可確定樣品中含有食品病原菌致瀉大腸埃希氏菌，本發明方法結果可靠，并且實驗速度快、特異性好，靈敏度高，并且可以同時分析多個樣品。在實驗耗材上，價格低，同時實驗技術易普及，操作簡單。與一般檢測方法相比，為一種高效快速經濟便捷的檢測方法。

技術領域

本發明屬于生物技術、食品檢測領域，涉及食品病原菌檢測相關的凝膠電泳(DGGE)技術，具體是一種食品病原菌致瀉大腸埃希氏菌快速檢測試劑盒及方法。

背景技術

致瀉性大腸埃希氏菌是引起人體以腹瀉癥狀為主的全球性疾病的常見病原菌，在我國引起感染性腹瀉的發病率居所有傳染病之首。其抗原結構有3種，即菌體抗原(O抗原)，包膜抗原(K抗原)和鞭毛抗原(H抗原)，O抗原是血清分型的基礎，一些特殊的血清型具有病原性，能引起人類腹瀉，故稱為致泄性大腸桿菌，嬰兒腹瀉中檢出率很高，在成人中亦可成散在或暴發流行。人在感染大腸埃希氏菌后的癥狀為胃痛、嘔吐、腹瀉和發熱。感染可能是致命性的，尤其是對孩子及老人。

該菌廣泛存在于飲用水，受污染牛奶，肉類食品以及水產品中，如何快速的檢測食品中的食品病原菌成為了我們目前一個急需解決的問題。但傳統的檢測技術試驗周期比較長、步驟比較繁瑣，在突發公共衛生事件中該技術無法做到高通量快速檢測，不能起到有效的監測、預防作用。

發明內容

為建立一種實現高效、快速、準確且經濟的食品病原菌致瀉大腸埃希氏菌的快速檢測方法，本發明公開了一種基于PCR-DGGE檢測食品病原菌致瀉大腸埃希氏菌的試劑盒和檢測方法。

為了達到上述目的，本發明采用了下列技術方案：

本發明提供一種用于食品病原菌致瀉大腸埃希氏菌快速檢測的引物組及DNA片段，所述引物組包括SEQ ID NO：1-6所示的引物；所述DNA片段包括SEQ ID NO：7、SEQ IDNO：8所示的片段。

進一步，所述引物組及DNA片段是通過化學合成的核苷酸片段。

本發明還提供一種用于食品病原菌致瀉大腸埃希氏菌快速檢測的試劑盒，包括上述的引物組和DNA片段，PCR緩沖液，STE緩沖液。

進一步，所述PCR緩沖液包括5μl 10×Easy Taq Buffer，4μl 10mmol/L dNTPs，1μl上游引物，1μl下游引物，1μl Taq酶，1.5μl基因組DNA，36.5μl ddH2O。

進一步，所述STE緩沖液是由0.584g的NaCl、0.12g的Tris和0.37g的EDTA溶解于100ml的雙重蒸餾水配制而成的。

本發明還提供一種食品病原菌致瀉大腸埃希氏菌快速檢測的方法，包括以下步驟：

步驟1，提取樣品微生物基因組總DNA；

步驟2，分別以超純水、化學合成的DNA片段及樣品總DNA為模板進行PCR擴增，超純水擴增產物作為陰性對照，DNA片段擴增產物作為待測樣品的標準；樣品PCR擴增產物作為DGGE檢測的待測樣品；

步驟3，對標準和待測樣品進行DGGE檢測；