[發明專利]一種非酒精性脂肪性肝炎的lncRNA標志物的制備方法

在審

• 申請號: 202011548772.0
• 申請日: 2020-12-23
• 公開（公告）號: CN112626197A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 梁廷明;馬敏娟;顧怡寧;鄢盛龍;夏靜
• 申請（專利權）人: 南京師范大學常州創新發展研究院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;G16B25/00
• 代理公司: 蘇州國卓知識產權代理有限公司 32331
• 代理人: 張入文

一種非酒精性脂肪性肝炎的lncRNA標志物的制備方法，本發明涉及非酒精性脂肪性肝炎研究技術領域，從NCBI的GEO數據庫中篩選出小鼠NASH相關模型的lncRNA測序數據集；分別對lncRNA測序數據集進行差異lncRNA的表達分析；構建MCD飲食誘導的小鼠NASH模型；將血清進行甘油三脂和總膽固醇的檢測；將小鼠肝組織總RNA進行反轉錄；以反轉錄產物為模板，檢測步驟二中得到小鼠NASH中差異表達的lncRNA。可用于判斷非酒精性脂肪性肝炎的進程和嚴重程度；NONMMUT015697、NONMMUT061275、NONMMUT013553可有效區分非酒精性脂肪性肝炎樣本和正常樣本；NONMMUT015697、NONMMUT061275、NONMMUT013553還可用于制備抑制非酒精性脂肪性肝炎的藥物，為臨床在分子水平上開發非酒精性脂肪性肝炎提供了新的方法，同時為非酒精性脂肪性肝炎的治療提供了新的藥物靶點。

技術領域

本發明涉及非酒精性脂肪性肝炎研究技術領域，具體涉及一種非酒精性脂肪性肝炎的lncRNA標志物的制備方法。

背景技術

非酒精性脂肪性肝炎(NASH，nonalcoholic steatohepatitis)是非酒精性脂肪肝(NAFLD，nonalcoholic fatty liver)的一種極端發展形式，定義為伴隨有炎癥及肝細胞損傷的脂肪變性現象的出現，主要表現是無酗酒人群肝臟脂肪蓄積，進而導致炎癥和纖維化，部分患者最后會進展成肝硬化甚至肝癌。NAFLD的發病率在國內外日益增加，已經成為了全球范圍的威脅公共健康的重大問題。中國成年人群NAFLD患病率最高達27％，NAFLD已取代慢性乙型肝炎成為我國第一大慢性肝病。

NASH以脂肪浸潤、肝細胞損害、炎癥和纖維化為其特征。NASH涉及營養代謝、免疫炎癥、遺傳和細胞應激修復等多個方面異常。目前NAFLD的發病機制被廣泛接受的是“多重打擊學說”，胰島素抵抗和肝細胞內脂質堆積為第一次打擊，隨后觸發了一系列的細胞毒性事件，如繼發的炎癥反應、氧化應激、內質網應激、細胞死亡等為第二次打擊。雖然目前被廣泛認可的“多重打擊學說”能部分揭示NAFLD的發病機制，但其病因及病理機制非常復雜，至今仍未完全闡明。NASH在組織學上呈現出小葉炎癥和肝細胞氣球樣變特征，與NAFLD相比，具有更快的纖維化進展速度。對肝臟脂肪變性NAFLD的診斷需要有組織學或者影像技術證據顯示肝細胞脂肪變，即組織學檢查顯示≥5％肝細胞脂肪變或磁共振技術測定的質子密度脂肪分數(proton density fat fraction，PDFF)≥5.5％。microRNAs(lncRNAs)通過多種途徑參與NAFLD的發生發展，如調節碳水化合物代謝、肝細胞中脂質的分解代謝等。由于循環中的lncRNAs非常穩定，在血漿或血清中具有高度重復性和一致性，是指示不同肝臟疾病肝損傷和肝損害的理想替代物。NASH的常見損傷有:脂肪沉積、小葉炎癥(典型者伴有多形核白細胞浸潤)、肝細胞氣球樣變、竇周纖維化,可能還有Mallory小體,糖生成核(glycogenated nuclei)也常出現。大家一致認為單有脂肪沉積和輕度小葉慢性炎癥不足以確定本病的診斷。NASH的診斷主要根據臨床和病理特點作出,而且尚無臨床或組織學標志能判定哪種病人會繼續進展到肝病末期。NASH的強異質性可能是造成單個基因指標診斷效能低及不一致的主要原因，通過多基因聯合有望提高診斷效能。遺傳學、表觀遺傳學和組學方法不僅揭示了NAFLD發生發展的機制，也提供了許多潛在的新標志物。需繼續探索新標志和組合，并對現有標志或標志組合進行大規模驗證。對NASH的標志物進行多非編碼RNA基因，特別是針對lncRNA的聯合分析研究，從組學的角度出發，結合動物實驗驗證，顯得尤為重要。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的缺陷和不足，提供一種設計合理的非酒精性脂肪性肝炎的lncRNA標志物的制備方法，為臨床在分子水平上開發非酒精性脂肪性肝炎提供了新的方法，同時為非酒精性脂肪性肝炎的治療提供了新的藥物靶點。

為達到上述目的，本發明采用了下列技術方案：它的操作步驟如下：