[發明專利]一種利用細菌非生長耦聯特性生產β-1,3-葡聚糖的方法

有效

• 申請號: 202011544624.1
• 申請日: 2020-12-23
• 公開（公告）號: CN112646846B
• 公開（公告）日: 2023-01-31
• 發明（設計）人: 袁建國;吉武科;高先嶺
• 申請（專利權）人: 山東國力生物科技有限公司;山東元核生物工程有限公司
• 主分類號: C12P19/08
• 分類號: C12P19/08;C12R1/01
• 代理公司: 濟南日新專利代理事務所(普通合伙) 37224
• 代理人: 劉亞寧

1.一種利用細菌非生長耦聯特性生產β-1,3-葡聚糖的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.將產β-1,3-葡聚糖菌株進行活化，制備種子培養液；

S2.將種子培養液接入發酵培養基中，進行發酵培養；

發酵培養溫度為28～32℃，起始pH7.0，攪拌轉速120～200r/min，通風量0.35～0.65v.v.m，在發酵pH下降至5.4拐點之前通氧，通氧壓力0.3～0.5Mp，通氧10～15min；待發酵液細胞濃度7.5g/L時，停止發酵；

S3.發酵結束后，將60～80％的發酵液轉入轉化罐內；向剩余20～40％的發酵液中加入發酵培養基至初始發酵體積，再繼續進行二次發酵，發酵結束后，再將60～80％的發酵液轉入轉化罐內；如此循環5～6次；

S4.向轉化罐內分次流加糖液，進行全細胞轉化：

首次流加時間為發酵液轉入后1h內；

第二次流加時間為發酵液轉入后30～35h；

第三次流加時間為發酵液轉后40～45h；

轉化溫度28～32℃，攪拌轉速120～200r/min，通風量0.3～0.5v.v.m，糖液流加速度0.4～0.5m³/h，pH值維持在5.5～6.0，轉化總時間為58～65h。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述產β-1,3-葡聚糖菌株為土壤桿菌ATCC31749。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，制備種子培養液所用種子培養基的組成：以質量百分比計，蔗糖1.0～2.0％；(NH₄)₂HPO₄ 0.5～1.0％；KH₂PO₄0.15～0.2％；MgSO₄·7H₂O 0.1％；CaCO₃ 0.3％；玉米漿粉0.15～0.5％；pH調節至7.2；

28～32℃、150～240r/min振蕩培養16～24小時，得到種子培養液。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，發酵培養基的組成為：以質量百分比計，蔗糖5.0％；(NH₄)₂HPO₄ 0.5～1.0％；KH₂PO₄ 0.15～0.2％；MgSO₄·7H₂O 0.1％；CaCO₃0.15％；玉米漿粉0.1～0.5％；pH調節至7.0。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，流加糖液的總體積為初始發酵體積的20-40％；

首次流加時，糖液的加入量為初始發酵液體積的7.5-15％；

第二次流加時，糖液的加入量為初始發酵液體積的7.5-15％；

第三次流加時，糖液的加入量為初始發酵體積的5-10％。

6.根據權利要求1或5所述的方法，其特征在于，首次流加時還添加3-6mg/LUMP促進代謝因子。

7.根據權利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述糖液為質量濃度為20-50％的蔗糖溶液。