[發明專利]一種花生蛋白特征肽及其應用

有效

• 申請號: 202011541342.6
• 申請日: 2020-12-24
• 公開（公告）號: CN112250747B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 吳海鵬
• 申請（專利權）人: 青島吳昊植物油有限公司
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86;C11B1/04;C11B1/06;C11B3/00
• 代理公司: 佛山卓就專利代理事務所(普通合伙) 44490
• 代理人: 陳雪梅

本發明屬于蛋白標志物生物檢測領域，具體涉及一種花生蛋白特征肽及其應用，該特征肽的氨基酸序列為ENEGGNIFSG。本發明通過超高效液相色譜串聯飛行時間質譜方法篩選出特征肽，并設計合成對應的內標物，采用高效液相色譜與質譜聯用的分析技術，計算獲得花生加工副產品中花生過敏源蛋白的含量，進一步可以獲得花生蛋白的含量，該方法具有較好的線性、靈敏度、回收率和精密度。

技術領域

本發明涉及一種花生蛋白特征肽及其應用，尤其涉及一種針對花生油提取副產物的特征肽，具體涉及一種來源于花生Arah3/4蛋白的特征肽，及其在花生生產加工中的應用。

背景技術

花生是我國重要的油料作物和經濟作物，其油脂含量在46％-62％之間，大多數為不飽和脂肪酸。花生油氣味清香，滋味純正，營養豐富，是我國當前主要的油脂資源。我國目前花生油提取方法有壓榨法、溶劑浸出法、水劑法、水酶法，除了水酶法缺陷較小，其他三種方法雖然各有優點，但缺陷也很明顯。在油脂生產過程中，除了獲得油脂產品外，還得到各種各樣的加工副產物。我國每年植物油精煉所產生的副產物數量巨大，這些副產物如不加以利用，不僅資源浪費，還會造成嚴重的環境污染。目前對植物油精煉副產物利用的主要途徑有生產脂肪酸、制取磷脂產品、生產生物柴油等，但是其中花生組分的含量多少直接影響到副產物的品質和下一步應用，尤其是涉及到脫脂花生粕的食品加工行業，判斷其中的花生成分極其重要。同時，花生過敏是由花生中的某些蛋白引起的超敏反應，嚴重威脅著過敏患者的身體健康，需要對其中的過敏原進行相應的檢測保證產品質量。目前，世界衛生組織和國際免疫學會聯合會(WHO/IUIS)致敏原命名小組委員會公布了多種花生致敏原，并將其命名為Arah1～Arah17。其中，Arah3/4是其中的重要組分，占花生總蛋白的3.7%～4.3%。經研究發現Arah3/4蛋白具有4個線性IgE結合表位，因此該致敏原對溫度、ph、酶解等較不敏感，含量較為穩定。

花生仁粕是以花生米經榨取提煉出燃料后的商品，一般花生仁粕分一次粕，二次粕。可是在實際中除開花生仁粕，也有豆餅、花生仁渣。花生仁渣指的是用的是花生仁來壓榨油后剩余的花生仁渣，花生仁渣的營養價值較高，其中，粗蛋白質含量可達48%以上。精氨酸含量高達5.2%。但是傳統高溫壓榨后花生仁渣中蛋白質嚴重變性，營養與物化特性降低，通常只用作飼料或肥料，無法開發花生蛋粉、花生奶、分離蛋白等高附加值的產品。而申請人在前期研究過程中采用分級、烘干、調質、壓榨等技術制備炒胚水提壓榨花生油，明確了最優參數，制備的花生油達到我國一級花生油的標準。花生油中總甾醇含量為114.57毫克/100克，不飽和脂肪酸如亞油酸、花生酸等含量為35.3%和1.7%，均高于普通方法壓榨的花生油。最關鍵的是，副產物花生仁渣中殘油率低，蛋白氮溶指數為73.58%，遠高于普通壓榨11.6%的水平，變性程度顯著降低，可以通過再加工制備花生蛋白粉、花生蛋白奶、花生醬等產品，但是現有技術中缺乏相應的手段對其中的致敏原、花生蛋白有效成分等進行檢測，無法實現可以指標化的質控標準。而且現有技術中同樣也缺乏針對花生蛋白粉、花生蛋白奶、花生醬等產品中有效花生成分含量的有效檢測手段。

發明內容

本發明的目的是為了克服上述背景技術的不足，本發明提供了來源于花生Arah3/4蛋白的特征肽，所述特征肽可以用于檢測花生產品，尤其是花生生產副產品的生物檢測，更進一步的涉及炒胚水提花生生產工藝中的檢測。使用該特征肽可以準確檢測樣品中的花生Arah3/4蛋白含量，進一步可以半定量的獲得花生總蛋白的含量，具有較高的特異性、靈敏度、回收率和精密度。

其中所述的特征肽選自：ENEGGNIFSG；

同時，本申請還提供內標特征肽，其中所述的內標特征肽選自：ENEGGNIFS*G，其中S*為碳氮全同位素標記的氨基酸；

進一步的，本發明提供一種上述蛋白特征肽在樣品檢測中的應用方法，包括如下步驟：