[發(fā)明專利]一種花生蛋白特征肽及其應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011541342.6
• 申請日: 2020-12-24
• 公開（公告）號: CN112250747B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發(fā)明（設計）人: 吳海鵬
• 申請（專利權）人: 青島吳昊植物油有限公司
• 主分類號: C07K14/415
• 分類號: C07K14/415;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72;G01N30/86;C11B1/04;C11B1/06;C11B3/00
• 代理公司: 佛山卓就專利代理事務所(普通合伙) 44490
• 代理人: 陳雪梅

1.一種花生蛋白特征肽，其特征在于，所述的特征肽的氨基酸序列為ENEGGNIFSG。

2.如權利要求1所述的一種花生蛋白特征肽在花生致敏原檢測中的應用，其特征在于：所述的檢測采用液質聯(lián)用檢測方法，所述的檢測中使用的特征肽的氨基酸序列為ENEGGNIFSG。

3.如權利要求2所述的應用，其特征在于：所述液質聯(lián)用檢測方法包括如下步驟：

取待測樣品與內標物同位素標記特征肽混合溶于水后進行酶解，采用液質聯(lián)用檢測方法對酶解液進行分離檢測，計算特征肽和同位素標記特征肽的峰面積比，代入線性回歸方程得到酶解液中特征肽的濃度，計算樣品中Arah3/4的含量，判斷得到樣品中致敏原的含量；

所述的同位素標記特征肽的氨基酸序列為ENEGGNIF S*G，其中S*為碳氮全同位素標記的氨基酸。

4.如權利要求3所述的應用，其特征在于：所述線性回歸方程采用如下方法獲得：

配制系列含特征肽和同位素標記特征肽的標準溶液，采用液質聯(lián)用檢測方法進行分離檢測，計算特征肽和同位素標記特征肽的峰面積比，線性回歸得到方程Y＝kX+b，其中，Y為特征肽和同位素標記特征肽的峰面積比，X為特征肽的摩爾濃度，單位為nM；k為線性方程的斜率；b為線性方程的截距。

5.如權利要求3或4所述的應用，其特征在于：待測樣品先進行預處理，所述的待測樣品的預處理方法如下：

將待測樣品干燥、粉碎，加入水制得樣品懸濁液，將樣品懸濁液稀釋后，取稀釋液，加水、內標物和DTT，水浴加熱，然后加入IAA，靜置，加入碳酸氫銨溶液和胰蛋白酶，在水浴中酶切，最后加入甲酸終止反應，過濾膜。

6.如權利要求5所述的應用，其特征在于：所述的待測樣品的預處理方法如下：

將待測樣品干燥、粉碎，稱取1g粉碎樣品加入1mL超純水制得樣品懸濁液，將樣品懸濁液1∶50比例用水稀釋后，取10μL樣品稀釋液，加825μL超純水、10μL同位素內標和10μL的600μM DTT，水浴加熱，然后加入30μL的600μM IAA，靜置，加入100μL500μM碳酸氫銨溶液和10μL的400μg/mL胰蛋白酶，在水浴中酶切，最后加入5μL的甲酸終止反應，過濾膜。

7.如權利要求3或4所述的應用，其特征在于：液質聯(lián)用檢測方法為液相色譜串聯(lián)飛行時間質譜檢測，所述的色譜的流動相為：流動相A為0.1%甲酸水溶液；流動相B為0.1%的甲酸乙腈；所述的色譜流動相的梯度為0～1min，3%B；1～10min，3%B～30%B；10～15min，30%B～35%B；15～20min，35%B～80%B；21～25min，80%B～3%B；26～30min， 3%B。

8.一種如權利要求1所述的花生蛋白特征肽在炒胚水提花生油副產品中花生致敏原檢測中的應用，其特征在于：所述炒胚水提花生油副產品的生產方法包括以下步驟：

（1）選取原料，脫除花生紅衣，破碎至3-6瓣的花生瓣；

（2）將花生瓣在220-230℃的條件下翻炒20-30分鐘；

（3）對翻炒后的花生瓣進行溫度和水分的調節(jié)，使花生瓣軟化，軟化后的花生瓣水分為7-8%，溫度為70-85℃；

（4）將軟化后的花生瓣送入榨油機中進行壓榨得到初榨花生油和花生殘渣，其中，入榨溫度為70-85℃，在5-10Mpa下處理40-60min，再在110-120℃，15-20Mpa下處理30-50min，最后在125-135℃，35-40Mpa下處理30-50min；

（5）在初榨花生油和花生殘渣中加入單硬脂酸甘油酯的水溶液、吐溫的水溶液和油酸鹽的水溶液，攪拌混合均勻，提取花生油，同時獲得一級花生渣；

（6）對提取的花生油進行離心處理，分離出清油層和乳化層，冷凍，解凍，再次離心，保留上層清油，離心產物為二級花生渣；

（7）將步驟（5）、（6）收集到的花生渣攪拌混合成型，制備成最終炒胚水提花生副產物；

所述檢測采用液質聯(lián)用檢測方法。