[發(fā)明專利]一種馬鈴薯蛋白水解物，制備及在貼壁細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011539958.X
• 申請日: 2020-12-23
• 公開（公告）號: CN112851753B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 丁功濤;擺倩文;馬忠仁
• 申請（專利權(quán)）人: 西北民族大學(xué)
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K7/08;C07K14/415;C07K1/14;C07K1/34;C12P21/06;C12N5/071
• 代理公司: 上海微策知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 31333
• 代理人: 李萍

本發(fā)明涉及生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種馬鈴薯蛋白水解物，制備及在貼壁細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用。其包含復(fù)合活性多肽和氨基酸；所述氨基酸的含量至少為25wt％。本發(fā)明中對馬鈴薯蛋白水解物制備工藝進(jìn)行優(yōu)化改進(jìn)的同時，通過分離濃縮的方法獲得了小于5kD組分，應(yīng)用于MDCK貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，通過檢測鑒定尋找到16種肽段，這16種肽段是促細(xì)胞增殖的主要肽段。為馬鈴薯蛋白高值化利用提供新思路，同時為開發(fā)馬鈴薯蛋白水解物替代部分血清培養(yǎng)基提供參考。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及到一種馬鈴薯蛋白水解物，制備及在貼壁細(xì)胞培養(yǎng)中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著生物科學(xué)研究的快速發(fā)展，低血清培養(yǎng)已成為一個研究熱點(diǎn)，有著廣泛的應(yīng)用前景。通過對細(xì)胞營養(yǎng)與代謝和外源蛋白表達(dá)機(jī)制等機(jī)理的深入研究，將進(jìn)一步促進(jìn)無血清培養(yǎng)基的開發(fā)，使細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在生物制備、疫苗工程、細(xì)胞等領(lǐng)域得到更廣泛的應(yīng)用。目前，在對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時，大多數(shù)情況下會在培養(yǎng)基中加入一定比例的血清以提供細(xì)胞生長所需的營養(yǎng)和各種生長因子，而馬鈴薯蛋白含豐富的蛋白質(zhì)、粗纖維、碳水化合物，具有19種均衡的氨基酸組分，其水解產(chǎn)物能為細(xì)胞提供有益的營養(yǎng)物質(zhì)，可以改變細(xì)胞生長環(huán)境，改善生長狀況，對細(xì)胞代謝、生長、凋亡等生命活動產(chǎn)生調(diào)控作用。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述技術(shù)問題，本發(fā)明的第一方面提供了一種馬鈴薯蛋白水解物，其包含復(fù)合活性多肽和氨基酸；所述氨基酸的含量至少為25wt%。

作為本發(fā)明一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述復(fù)合活性多肽至少包含具有如下氨基酸序列的多肽：

SEQ?ID?No?1：GQLIVVPQNF

SEQ?ID?No?2：QLIVVPQNF

SEQ?ID?No?3：IDPGDSDIIK

SEQ?ID?No?4：GGGGGYGGGGGYGGGGGGGYGGGR

SEQ?ID?No?5：VPTVDVSVVDL

SEQ?ID?No?6：NPEEIPWG

SEQ?ID?No?7：APGKPPVDY

SEQ?ID?No?8：APIDVVVPPGNTGLDPS。

作為本發(fā)明一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述復(fù)合活性多肽還包含具有如下氨基酸序列的多肽：

SEQ?ID?No?9：PPVLPPQE

SEQ?ID?No?10：VPELGPDVNF

SEQ?ID?No?11：GEGTNTWDRFE。

作為本發(fā)明一種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述氨基酸至少包含氨基酸組合；所述氨基酸組合由絲氨酸、谷氨酸、纈氨酸、亮氨酸、酪氨酸、氨基丁酸、組氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺組成；所述氨基酸組合的含量至少占所述馬鈴薯蛋白水解物質(zhì)量的18wt%。

本發(fā)明的第二個方面提供了一種如上所述的馬鈴薯蛋白水解物的制備方法，其包括如下步驟：

（1）底物配制：取馬鈴薯蛋白粉置于反應(yīng)釜中，加入純水?dāng)嚢枞芙獾玫今R鈴薯蛋白粉溶液；

（2）酶解：在上述馬鈴薯蛋白粉中加入蛋白酶，攪拌混勻之后加入0.1M/L?HCl調(diào)節(jié)pH至5.5~7.5，設(shè)置溫度至40~60攝氏度，酶解反應(yīng)3~8小時；

（3）滅活：對上述酶解后的體系升溫至至少95攝氏度以上，處理至少15min，然后冷卻至室溫收集粗制水解液；

（4）后處理：對所述粗制水解液進(jìn)行離心收集上層清液，并對改采用超濾膜過濾得到精制水解液，干燥，即得。