[發明專利]一種多酚類物質脫除杏仁過敏原測定實驗方法

在審

• 申請號: 202011539372.3
• 申請日: 2020-12-23
• 公開（公告）號: CN112630176A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 張愛琳;楊薇;張華;梁筱研;遲越;苗穎
• 申請（專利權）人: 天津農學院
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N27/447;G01N15/02;G01N27/26
• 代理公司: 北京化育知識產權代理有限公司 11833
• 代理人: 涂琪順

本發明公開了一種多酚類物質脫除杏仁過敏原測定實驗方法，包括如下步驟：準備材料；沒食子酸標準曲線繪制；總酚的測定；SDS?PAGE電泳；納米粒度和Zeta電位儀分析。在研究的各種果汁中，POM果汁顯示出與杏仁蛋白形成復合物有更大的能力。納米粒度和Zeta電位儀測定表明杏仁蛋白提取物粒徑急劇增加至約3800nm，并且用POM汁處理后通過電泳分析到杏仁蛋白較少。這些觀察結果支持多酚和杏仁蛋白之間形成復合物，這些復合物就可以通過過敏原沉淀防止杏仁過敏原對抗體的識別。

技術領域

本發明涉及一種測定實驗方法，特別涉及一種多酚類物質脫除杏仁過敏原測定實驗方法。

背景技術

食品過敏對人們的生活質量產生了負面影響，有的甚至會危及生命。極少量的杏仁也會導致嚴重的反應，并且它們被包含在最常引起過敏的一組食物中。有研究表明多酚和富含多酚的果汁能與花生過敏原結合。酚酸類化合物和膳食多酚能有效的減弱花生過敏原與IgE結合和嗜堿性粒細胞脫粒。

各種水果，蔬菜和飲料都富含豐富的多酚，并且它們為人們提供多種健康益處。多酚可降低氧化應激，并可預防癌癥或心血管疾病。另外，多酚可通過疏水性和氫相互作用與蛋白質形成可溶性或不溶性復合物。Soares等人報道多酚與不同的蛋白質相關聯包括牛血清白蛋白和人α-淀粉酶。多酚化合物的大小和結構顯著改變其結合的親和力，隨著分子量增加或在沒食子酰基團存在下親和力增加。茶多酚與乳α-和β-酪蛋白形成復合物，并且結構分析顯示出疏水性和親水性相互作用。這個想法進一步延伸到食物過敏原，多酚與食物過敏原相互作用，從而降低過敏食物的過敏性。例如，Chung和Champagne報道，向花生提取物和液體花生醬中加入酚酸降低了IgE的結合。同樣，單寧酸通過形成多酚蛋白復合物去除花生過敏原。Plundrich等人，研究了各種富含多酚的植物汁液和提取物對花生粉過敏原的影響，結果表明蔓越莓汁處理的花生粉樣品在小鼠模型中降低了過敏反應。但是目前還沒有相關文獻記載多酚類物質脫除杏仁過敏原測定實驗。

發明內容

本發明的目的在于提供一種多酚類物質脫除杏仁過敏原測定實驗方法，在研究的各種果汁中，POM果汁顯示出與杏仁蛋白形成復合物有更大的能力。納米粒度和Zeta電位儀測定表明杏仁蛋白提取物粒徑急劇增加至約3800nm，并且用POM汁處理后通過電泳分析到杏仁蛋白較少。這些觀察結果支持多酚和杏仁蛋白之間形成復合物，這些復合物就可以通過過敏原沉淀防止杏仁過敏原對抗體的識別，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種多酚類物質脫除杏仁過敏原測定實驗方法，包括如下步驟：

步驟1：準備材料：Folin-Ciocalteu試劑、沒食子酸標準品、考馬斯亮藍染液、蛋白預染Marker、β-巰基乙醇、SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液、三羥甲基氨基甲烷、十二烷基硫酸鈉SDS、甘氨酸、POM汁、BB汁、CG汁；

步驟2：沒食子酸標準曲線繪制

準確移取沒食子酸標準溶液(1000mg/L)2.5、5.0、10.0、15.0、20.0至50.0mL容量瓶中，分別配制成質量濃度為50、100、200、300、400mg/L的溶液，然后加入5.0mL質量濃度為40％的Folin-Ciocalteu試劑，反應8min后分別加入4.0mL7.5％Na₂CO₃溶液，再用去離子水定容至10ml，分別于30℃下反應1.0h，測定提取液在760nm處的吸光值；

步驟3：總酚的測定

使用Folin-Ciocalteu比色法測定POM汁、BB汁和CG汁的總酚量，并表示為每升毫克沒食子酸當量，為制備樣品，將稀釋的500μLPOM汁、BB汁、CG汁和2.5mL稀釋的Folin-Ciocalteu試劑在室溫下混合8min，隨后加入1.5mL的7.5％Na₂CO₃，在暗處培育2小時后，使用紫外可見分光光度計測量樣品在760nm處的吸光度；