[發明專利]一種基于莖環法的多重熒光定量PCR檢測非編碼小RNA的引物組

有效

• 申請號: 202011534669.0
• 申請日: 2020-12-22
• 公開（公告）號: CN113005181B
• 公開（公告）日: 2022-01-18
• 發明（設計）人: 周其偉;王軍;劉剛
• 申請（專利權）人: 廣州血康陸道培生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

1.一種熒光定量PCR檢測非編碼小RNA的引物組，其特征在于，包括逆轉錄延伸引物、逆轉錄引物、上游通用引物、下游通用引物和特異性探針；

所述逆轉錄延伸引物從5’端到3’端依次為：上游通用引物序列和特異性結合序列1；所述特異性結合序列1與待檢測的非編碼小RNA的5’端的6～15個堿基相同；所述上游通用引物序列為16～25個堿基；所述逆轉錄延伸引物的3’端不能繼續延伸；所述上游通用引物序列不與待檢測的非編碼小RNA序列同義或互補，所述上游通用引物的堿基數量為16～25個；

所述逆轉錄引物的5’端到3’端依次為：莖環序列和特異性結合序列2，所述特異性結合序列2為 待測非編碼小RNA的3’端的6～12個堿基 的反向互補序列；

所述上游通用引物，其序列與所述的逆轉錄延伸引物中的上游通用引物序列相同；

所述下游通用引物，其序列與所述的逆轉錄引物中的莖環序列的部分相同，其堿基數量為16～25個；

所述特異性探針與待檢測非編碼小RNA序列的部分片段相同，其堿基數量為17～30個。

2.一種非疾病治療診斷目的熒光定量PCR檢測非編碼小RNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.將權利要求1所述的逆轉錄延伸引物、逆轉錄引物和待檢測非編碼小RNA在同一體系內進行逆轉錄反應，得到逆轉錄產物；

S2.以步驟S1的逆轉錄產物為模板，使用權利要求1所述的上游通用引物、下游通用引物、特異性探針進行熒光定量PCR反應。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，進行多重熒光定量PCR檢測多個非編碼小RNA，特異性探針5’端分別標記不同的發光基團，所述多個非編碼小RNA為2～5個非編碼小RNA。

4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于，權利要求1所述逆轉錄引物、逆轉錄延伸引物、上游通用引物、下游通用引物和特異性探針的體系終濃度均為50～200nM。

5.權利要求1所述引物組在非疾病治療診斷目的熒光定量PCR檢測非編碼小RNA中的應用，或在制備熒光定量PCR檢測非編碼小RNA的試劑盒中的應用。