[發明專利]非洲豬瘟病毒P12蛋白納米顆粒及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202011533399.1
• 申請日: 2020-12-23
• 公開（公告）號: CN112574319B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 林堅;朱新杰;李紫晨;鄭夢竹;沈顯貴
• 申請（專利權）人: 非零和（北京）投資管理有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12P21/00;A61K47/69;A61K39/12;A61P31/20
• 代理公司: 北京辰權知識產權代理有限公司 11619
• 代理人: 金銘

本發明涉及一種非洲豬瘟病毒P12蛋白納米顆粒及其制備方法與應用，所述蛋白納米顆粒由蛋白質單體自組裝形成，所述蛋白質單體為從氨基酸至羧基端依次包含金屬硫蛋白、谷胱甘肽硫轉移酶和P12蛋白的融合蛋白。本發明將GSTP1?MT3蛋白與非洲豬瘟病毒的P12抗原進行融合表達，在畢赤酵母表達系統中，經亞鐵離子的誘導，能夠自發地形成蛋白納米顆粒。通過在小鼠體內進行免疫原性測定，該P12蛋白納米顆粒能引起很強的免疫反應，極有潛力開發成為新的安全有效的非洲豬瘟病毒疫苗。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種非洲豬瘟病毒P12蛋白納米顆粒及其制備方法與應用。

背景技術

非洲豬瘟(African?swine?fever，ASF)是非洲豬瘟病毒(African?swine?fevervirus，ASFV)感染家豬或野豬引起的一種急性、出血性、高度接觸性傳染病，其特征是病程短、高熱和出血性病變，急性感染死亡率高達100％，嚴重威脅全球養豬業。

20世紀60年代，人們最先開始嘗試使用ASF滅活疫苗，但是絕大部分無保護作用。2014年Blome等利用最新的佐劑聯合ASF滅活疫苗免疫，仍然不能抵御強毒攻擊。利用保護性抗原(p72、p54、CD2v等)制備的亞單位疫苗，免疫豬僅能提供部分的保護作用，聯合使用免疫卻不能提供保護作用。人們嘗試使用保護性抗原表達的DNA疫苗和利用病毒載體表達的病毒載體疫苗，免疫效果同亞單位疫苗相似，也只能提供部分保護或無保護作用。

ASFV的基因組約170-193kb，含有150-167個開放閱讀框(Open?reading?frames，ORFs)，編碼150-200種蛋白質，其中約50多種是病毒的結構蛋白。ASFV病毒粒子為二十面體結構，直徑約200nm，是由核殼蛋白包裹的病毒基因組DNA、病毒內囊膜、病毒衣殼和外囊膜組成的。囊膜蛋白是構成病毒顆粒的主要結構蛋白，也是重要的表面抗原，與宿主細胞嗜性、致病性、免疫原性密切相關。根據目前的研究，已知功能的ASFV囊膜蛋白主要有CD2v、p54、p12、p30、p17和p22等，然而，這些蛋白作為抗原免疫豬后，均不能獲得有效的保護作用。例如，Neilan等人將P22與P30、P54、P72蛋白作為抗原對豬進行“雞尾酒”式混合免疫，也沒有獲得有效保護作用。

通過對現有技術進行討論和分析，目前的非洲豬瘟病毒亞單位疫苗、核酸疫苗和病毒活載體疫苗的保護效力偏低。因此需要進一步研究非洲豬瘟病毒蛋白免疫原性，并利用新技術和新方法構建出安全有效的ASF疫苗。

發明內容

本發明的目的在于提供一種非洲豬瘟病毒P12蛋白納米顆粒及其制備方法與應用。本發明將GSTP1-MT3蛋白與非洲豬瘟病毒的P12抗原進行融合表達，在畢赤酵母表達系統中，經亞鐵離子的誘導，能夠自發地形成蛋白納米顆粒。通過在小鼠體內進行免疫原性測定，該P12蛋白納米顆粒能引起很強的免疫反應，極有潛力開發成為新的安全有效的非洲豬瘟病毒疫苗。

為此，第一方面，本發明提供一種非洲豬瘟病毒P12蛋白納米顆粒，所述蛋白納米顆粒由蛋白質單體自組裝形成，所述蛋白質單體為從氨基酸至羧基端依次包含金屬硫蛋白、谷胱甘肽硫轉移酶和P12蛋白的融合蛋白。

進一步，所述蛋白納米顆粒由所述蛋白質單體經金屬離子誘導而自組裝形成，所述金屬離子為Fe²⁺。