[發明專利]一種可可粉中摻雜可可殼的定量檢測方法

有效

• 申請號: 202011531877.5
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112782293B
• 公開（公告）日: 2023-01-13
• 發明（設計）人: 張雅莉;韓建勛;付萌;李婷;李捷;劉浩
• 申請（專利權）人: 譜尼測試集團北京檢驗認證科學研究院有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72
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• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種可可粉中摻雜可可殼的定量檢測方法，主要基于可可殼的特征標志物苦木內酯I(Nigakilactone I)來檢測可可粉中可可殼的含量。所述定量檢測方法包括以下步驟：1)樣品前處理：稱取適量樣品，甲醇溶解，超聲提取，離心取上清液，濃縮復溶，微孔濾膜過濾，制得樣品溶液；2)液相色譜分離：將樣品溶液中待測特征標志物與其它雜質充分分離；3)質譜檢測：建立特征標志物的峰面積與可可粉中可可殼的摻入量之間的線性標準曲線，保留時間和精確質量數定性，外標標曲法定量。該方法可對可可粉中摻雜1％及以上(質量分數)的可可殼進行定量檢測，具有快速、準確、穩定等特點，可實現可可粉市場監管的定量檢測需求。

技術領域

本發明涉及一種可可粉中摻雜可可殼的定量檢測方法，尤其是涉及一種基于特征標志物的可可粉中摻雜可可殼的定量檢測方法。

背景技術

可可粉具有濃烈芬芳的獨特香味，富含多種營養元素，是世界上三大嗜好性飲料之一。然而可可殼的摻入是可可粉常見質量問題之一，可可殼的存在不僅會影響感官體驗，而且可能引起霉菌毒素、重金屬或微生物等污染?？煽煞壑锌煽蓺さ膿饺朐蛑饕▋蓚€，一是人為添加，為牟取暴利，一些不法企業以飼料名義進口可可殼，粉碎加工后噴上可可香精，然后摻到可可粉中；二是生產過程殘存，在一定程度上，可可加工過程中可可殼的殘存是不能完全避免的。目前國內外尚無可可粉中可可殼摻入量的質控標準，國際食品法典委員會(CAC)發布的標準CXS 141-1983規定可可漿和可可蛋糕中可可殼摻入量的限值為5％(m/m)，成為了可可加工行業普遍接受的可可殼摻入限值。

截止到目前，可可粉中可可殼摻入量的檢測方法有顯微鏡法、重量法、分光光度法、液相色譜法、以及近紅外光譜法等，但以上方法受限于穩定性、靈敏度、準確性和選擇性等原因，無法為不同產地、不同品種和不同加工階段的樣品提供可靠和可重復的結果。因此，亟需建立一種快速、準確、穩定的可可粉中可可殼摻入量的定量檢測方法，為監管和規范可可粉市場提供一種新的科學依據。

發明內容

本發明提供一種可可粉中摻雜可可殼的定量檢測方法，主要基于可可殼的特征標志物苦木內酯INigakilactone I來檢測可可粉中可可殼的含量，包括以下步驟：

a)樣品前處理：稱取適量樣品，甲醇溶解，超聲提取，離心取上清液，濃縮復溶，微孔濾膜過濾，制得樣品溶液；

b)液相色譜分離：將樣品溶液中待測特征標志物與其它雜質充分分離；

c)質譜檢測：建立特征標志物的峰面積與可可粉中可可殼的摻入量之間的線性標準曲線，保留時間和精確質量數定性，外標標曲法定量。

其中，液相色譜分離條件為：色譜柱選用C18或其它等效色譜柱；柱溫為40℃；流動相A相為5mmol/L乙酸銨水溶液，B相為乙腈，梯度洗脫；梯度洗脫的比例為0～3.0min，A為95％；3.0～8.0min，A為95％→80％；8.0～17.0min，A為80％→72％；17.0～22.0min，A為72％→10％；22.0～26.0min，A為10％；26.0～26.1min，A為10％→95％；26.1～28.0min，A為95％；流速為0.3mL/min；進樣量為5μL。

質譜檢測條件為：離子源為ESI^-；離子源溫度為100℃；脫溶劑氣溫度為250℃；脫溶劑氣流速為600L/h；錐孔氣流速為50L/h；毛細管電壓為2.0kV；錐孔電壓為40V；工作模式：MSMS模式；碰撞能量為15eV～40eV；掃描時間為0.2s。

特征標志物苦木內酯I的母離子為m/z 375.18，子離子為m/z 191.07、m/z289.07。

當可可殼摻入量為1％～50％范圍內時，苦木內酯I峰面積和可可殼的摻入量之間的線性關系良好，相關系數R²大于0.9999，檢出限為0.3％，定量限為1％。