[發(fā)明專利]利用BLI技術(shù)檢測(cè)新型冠狀病毒中和性抗體的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011531072.0
• 申請(qǐng)日: 2020-12-23
• 公開（公告）號(hào): CN112255420B
• 公開（公告）日: 2021-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高文靜;苗景赟;張曉慧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京百普賽斯生物科技股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/569;G01N21/45;G01B11/06
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

1.利用BLI技術(shù)檢測(cè)新型冠狀病毒中和性抗體的方法，其特征在于，先將同一濃度的人ACE2蛋白捕獲到生物傳感器表面上，再將新型冠狀病毒棘突蛋白R(shí)BD分別與不同濃度的待測(cè)中和性抗體預(yù)混，得到不同濃度的混合液，然后將各混合液分別與捕獲到生物傳感器表面上的人ACE2蛋白接觸，根據(jù)基于BLI技術(shù)的分子互作儀器檢測(cè)到的干涉光譜的相對(duì)位移強(qiáng)度變化來檢測(cè)新型冠狀病毒中和性抗體的抑制效率；通過計(jì)算抑制率，繪制抑制曲線，計(jì)算IC₅₀值，從而比較不同新型冠狀病毒中和性抗體的抑制能力；

基于BLI技術(shù)的分子互作儀器的檢測(cè)參數(shù)設(shè)置如下：

運(yùn)行以下程序：①Baseline 60-180s，基線步驟；②Loading 180-300s，傳感器捕獲人ACE2蛋白；③Baseline2 60-180s，基線步驟；④Association 180-300s，傳感器上的ACE2蛋白結(jié)合預(yù)混的新冠棘突蛋白R(shí)BD和新型冠狀病毒中和性抗體，檢測(cè)此步驟最終的結(jié)合信號(hào)；⑤Dissociation 0-20s，解離步驟；

轉(zhuǎn)速：1000rpm；運(yùn)行溫度：30℃；采集頻率：Standard kinetics 5.0 Hz，averaging by20；

人ACE2蛋白溶液的濃度為2-10μg/mL，按每孔200μL加入到分析樣品陣列孔中；

將50-100nM待測(cè)中和性抗體溶液按1.5-2倍濃度梯度稀釋，然后將不同濃度的待測(cè)中和性抗體溶液分別與50nM新型冠狀病毒棘突蛋白R(shí)BD溶液按等體積混合，得到不同濃度的混合液，然后將各混合液按每孔200μL分別加入到分析樣品陣列孔中；

用于配制所述人ACE2蛋白溶液的試劑為：含0.02% Tween-20和0.1% BSA的PBS溶液，pH7.4；

用于配制所述待測(cè)中和性抗體溶液和所述新型冠狀病毒棘突蛋白R(shí)BD溶液的試劑為：含0.02% Tween-20和0.1% BSA的PBS溶液，pH7.4。