[發明專利]一種評估胚胎發育潛力的方法

在審

• 申請號: 202011528425.1
• 申請日: 2020-12-22
• 公開（公告）號: CN112575068A
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 單旭東;李亨利;侯建文;田東梅;許文明;朱明輝
• 申請（專利權）人: 成都中醫藥大學;四川大學華西第二醫院;成都中醫藥大學附屬生殖婦幼醫院
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851
• 代理公司: 四川力久律師事務所 51221
• 代理人: 張浩

本發明涉及生殖醫學技術領域，具體涉及一種評估胚胎發育潛力的方法，包括以下步驟，獲得胚胎的培養液；確定所述培養液中線粒體DNA拷貝數；確認所述培養液中參考線粒體DNA拷貝數；將所述線粒體DNA拷貝數與所述參考線粒體DNA拷貝數進行比較，獲得所述線粒體DNA的相對量。通過使用胚胎的培養液，獲取培養液中的線粒體DNA拷貝數，并用線粒體的相對量來評估胚胎發育潛力，不需要對胚胎進行活檢，評估過程對胚胎無創傷。

技術領域

本發明涉及生殖醫學技術領域，具體涉及一種評估胚胎發育潛力的方法，特別是一種通過無創手段評估胚胎發育潛力的方法。

背景技術

胚胎質量始終是影響輔助生殖技術(assisted reproductive technology,ART)成功率的最重要的因素，但是目前尚缺乏有效、客觀和全面地評價胚胎質量的方法。

線粒體是細胞中重要的細胞器，除了可以為生命活動提供90％以上的能量外，也參與調節女性的生殖過程，在卵母細胞成熟、受精和早期的胚胎發育中扮演著關鍵角色。由于線粒體擁有一套獨立的遺傳物質，即線粒體DNA (mitochondrial DNA,mtDNA),它可以不完全依賴組基因進行半自主復制、轉錄和翻譯，因此已有許多學者對胚胎mtDNA拷貝數與胚胎質量、胚胎發育潛能、妊娠結局的關系做了相關研究，但是研究結果不盡相同，并且大多數需通過胚胎活檢技術等有創性研究方法。

但是，線粒體DNA拷貝數檢測時用到的胚胎活檢技術會對胚胎造成創傷。

發明內容

本發明的目的在于：針對現有技術存在的在胚胎活檢技術對胚胎造成創傷的問題，提供一種評估胚胎發育潛力的方法，該方法通過檢測D3卵裂器胚胎培養液中的線粒體DNA拷貝數，并將線粒體DNA拷貝數與形態學評分建立關聯，提供了一種新的評估胚胎發育潛力的方法。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種評估胚胎發育潛力的方法，包括以下步驟，

獲得胚胎的培養液；

確定所述培養液中線粒體DNA拷貝數；

確認所述培養液中參考線粒體DNA拷貝數；

將所述線粒體DNA拷貝數與所述參考線粒體DNA拷貝數進行比較，獲得所述線粒體DNA的相對量。

通過使用胚胎的培養液，獲取培養液中的線粒體DNA拷貝數，并用線粒體的相對量來評估胚胎發育潛力，不需要對胚胎進行活檢，評估過程對胚胎無創傷。

優選的，所述胚胎為D3胚胎。

優選的，所述培養液通過如下方法獲得，

選取2PN胚胎轉入過夜平衡的卵裂培養中單滴繼續培養至D3，并按照20ul/ 滴的標準收集胚胎移植后剩余的培養液。

優選的，所述線粒體DNA的相對量用于評估胚胎發育潛力。

優選的，還包括對胚胎進行形態學評分，建立培養液中線粒體DNA拷貝數與形態學評分的關系。

優選的，所述胚胎發育潛力包括D3胚胎形態學總評價和D3細胞發育速度中的至少一項。

優選的，使用數字PCR檢測確定所述培養液中線粒體DNA拷貝數；使用數字PCR檢測確定所述培養液中參考線粒體DNA拷貝數。

優選的，使用數字PCR檢測時，使用的培養液的量為20ul。

使用數字PCR僅需要20ul的培養液即能準確測試線粒體DNA拷貝數。

綜上所述，由于采用了上述技術方案，本發明的有益效果是：