[發明專利]一種預測腫瘤細胞化療耐藥性的標志物及其應用

在審

• 申請號: 202011528210.X
• 申請日: 2020-12-22
• 公開（公告）號: CN114371289A
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發明（設計）人: 王傳貴;孫蓮慧;唐玉敏;孟玲;范廣建;胡晨;潘波;張森
• 申請（專利權）人: 山東秉泰生物科技有限公司;泰山科學技術研究院;山東第一醫科大學第二附屬醫院
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/573;C07K16/40;C07K16/06;C07K1/16;C12N15/55;A61K45/00;A61P35/00
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 呂薇

本發明提供了一種預測腫瘤細胞化療耐藥性的標志物及其應用。具體方法為作為標志物的所述SirT7?S288位點的磷酸化形式是在前期根據化療藥物脅迫結合磷酸化質譜鑒定篩選出來的在化療藥物處理后，SirT7?S288位點磷酸化增強，通過制備針對SirT7?S288位點特異的磷酸化抗體用以檢測SirT7的磷酸化，作為腫瘤耐藥的檢測指標。本發明制作了特異的SirT7?S288p磷酸化抗體，可特異性檢測到接受化療藥物處理的腫瘤細胞中SirT7是否發生S288位的磷酸化，從而預見腫瘤細胞是否耐藥。為腫瘤化療藥物的針對性選擇提供可能性，為腫瘤精準治療提供新思路。

技術領域

本發明屬于腫瘤細胞耐藥性檢測技術領域，尤其涉及一種預測腫瘤細胞化療耐藥性的標志物及其應用。

背景技術

化療在腫瘤的治療中占有重要地位，但腫瘤細胞極易對化療藥物產生耐藥性，一旦癌細胞產生耐藥性，化療藥物就無法殺傷癌細胞，但卻對正常細胞造成殺傷，引起越來越大的副作用，導致治療失敗，腫瘤細胞耐藥性成為治療腫瘤的最大障礙之一。腫瘤化療采用最多的藥物是DNA損傷藥物，而DNA損傷藥物對DNA造成的損傷可以通過細胞中不同的DNA修復機制得到修復，這也是細胞對DNA損傷藥物產生耐藥性的主要原因。然而，患者對化療藥物的耐受性是有個體差異的，如何預測藥物的耐藥性及敏感性是如何選擇用藥的關鍵。對于藥物敏感性以及耐藥性的許多潛在生物標記物研究已經有一些，但僅有極少數有潛在臨床應用的可能，并且相對于分子靶向治療及免疫檢測點治療的靶向指示性，DNA損傷藥物缺乏相應的生物標記物來靶向指導藥物的選擇，因此，在個體化治療以及精準醫學背景下，開發研究更多的腫瘤耐藥的檢測指標，這也將是實施腫瘤預見、預后、個體化化療的前提。

蛋白磷酸化修飾在腫瘤化療耐藥性中發揮重要的作用，蛋白磷酸化是將外界刺激轉化為細胞內信號的一個主要機制，是一種廣泛的翻譯后修飾，同時也是原核和真核生物中最重要的調控形式。由于蛋白質氨基酸側鏈加入了一個帶有強負電的硝酸基團，發生酯化作用，從而改變了蛋白質的構型、活性及與其他分子相互作用的能力，在多種生物學過程，如信號傳導、基因表達、細胞分裂等的調控中起重要作用，異常的蛋白質磷酸化通常與癌癥有關。人類蛋白質組中含有十萬多個潛在的磷酸化位點，大多數磷酸化蛋白含有一個以上的磷酸化位點，并且以不同磷酸化形式的混合物存在，在細胞內活性調控中發揮重要的作用。在肺癌細胞中，p-GSK-3βser9升高是造成肺癌耐藥性的原因之一，Cx43-S368的磷酸化上調是造成卵巢癌化療耐藥的主要原因。因此，深入研究蛋白磷酸化修飾與腫瘤耐藥的關系與調控機制，有利于開發腫瘤耐藥預測指標及指導化療用藥。

組蛋白去乙酰化酶Sirtuin家族是調控腫瘤化療耐藥中非常關鍵的一類蛋白，它們是與酵母Sir2同源的相關酶類。Sirtuin家族由七個成員組成，SirT1-7，它們都有一個保守的NAD依賴的催化核心區，促進NAD依賴的去乙酰化酶活性以及ADP核糖轉移酶活性。Sirtuins依賴于其去乙酰化活性，參與調控細胞的代謝、衰老、增殖、抗壓及炎癥氧化應激反應等。Sirtuins具有復雜的促癌或抑癌作用，其中SirT7是Sirtuin家族中唯一定位在核仁的蛋白，大量的癌癥研究將SirT7歸為原癌基因，一方面SirT7通過去乙酰化H3K18維持癌癥的特征，另外一方面SirT7促進rDNA轉錄這一功能也正好符合癌細胞快速增殖對核糖體生成的需要。SirT7自身并沒有表現出原癌基因的特性，因為過表達SirT7并不能導致原生纖維母細胞發生癌變，因此認為在癌細胞中SirT7過量表達可能是為了滿足快速增殖的癌細胞對核糖體生成的需求。最近報道SirT7通過去琥珀酰化H3K22促進染色體凝集以及參與雙鏈DNA損傷(DSB)修復，這些研究揭示SirT7可能作為腫瘤研究的熱點蛋白，但SirT7能否作為腫瘤耐藥檢測或治療的靶點，目前的研究還不夠，還需要解決的問題是SirT7如何參與化療藥物脅迫以及SirT7的上下游調控如何。據報道，SirT7的磷酸化修飾介導SirT7的定位改變，對其功能影響至關重要。因此，研究SirT7的磷酸化修飾與腫瘤耐藥的關系與調控將變得極為有意義，有利于尋找腫瘤化療藥物耐藥性預測標志物，可實際用于臨床腫瘤預測預后與指導化療用藥。

發明內容