[發(fā)明專利]一種預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞化療耐藥性的標(biāo)志物及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011528210.X
• 申請(qǐng)日: 2020-12-22
• 公開（公告）號(hào): CN114371289A
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王傳貴;孫蓮慧;唐玉敏;孟玲;范廣建;胡晨;潘波;張森
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東秉泰生物科技有限公司;泰山科學(xué)技術(shù)研究院;山東第一醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/574
• 分類號(hào): G01N33/574;G01N33/573;C07K16/40;C07K16/06;C07K1/16;C12N15/55;A61K45/00;A61P35/00
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 呂薇

1.一種預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞化療耐藥性的標(biāo)志物，其特征在于，所述標(biāo)志物為組蛋白去乙酰化酶SirT7-S288位點(diǎn)磷酸化。

2.根據(jù)權(quán)利要求1提供的一種預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞化療耐藥性的標(biāo)志物的應(yīng)用，其特征在于，通過制備針對(duì)SirT7-S288位點(diǎn)磷酸化的特異性抗體，標(biāo)記所述標(biāo)志物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞化療耐藥性的標(biāo)志物的應(yīng)用，其特征在于，所述抗體制備方法包括如下步驟：

步驟一：以SirT7-S288位點(diǎn)為中心兩側(cè)各毗鄰4個(gè)氨基酸設(shè)計(jì)為一段14個(gè)氨基酸的SirT7-S288合成肽；

步驟二：合成含SirT7-S288磷酸化位點(diǎn)的抗原合成肽；

步驟三：全抗原免疫兔子及收集抗血清：將步驟二中SirT7-S288抗原合成肽與佐劑聯(lián)合免疫SFP級(jí)新西蘭大白兔，采用背部皮膚注射，多點(diǎn)注射抗原乳狀液；免疫次數(shù)包括3次注射和最后一次加強(qiáng)注射，產(chǎn)生SirT7-S288特異性磷酸化抗體，以ELISA測(cè)定抗血清針對(duì)目的合成肽的效價(jià)；

步驟四：純化并鑒定SirT7-S288特異性磷酸化抗體：采用合成肽偶聯(lián)瓊脂糖層析柱的親和層析法進(jìn)行抗體親和分離-親和純化方法，先過一次非磷酸化合成肽偶聯(lián)的層析柱去除抗血清中的非磷酸化抗體，得到含磷酸化抗體的血清；然后將上述血清過一次磷酸化合成肽偶聯(lián)的層析柱，最后洗脫得到磷酸化抗體的血清，最后通過Western blot實(shí)驗(yàn)鑒定抗體的效價(jià)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞化療耐藥性的標(biāo)志物的應(yīng)用，其特征在于，最后還包括如下步驟：采用SirT7-S288特異性磷酸化抗體檢測(cè)SirT7-S288磷酸化，作為腫瘤耐藥的檢測(cè)指標(biāo)。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞化療耐藥性的標(biāo)志物的應(yīng)用，其特征在于，步驟一中所述SirT7-S288合成肽的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞化療耐藥性的標(biāo)志物的應(yīng)用，其特征在于，在于腫瘤耐化療藥物檢測(cè)以及耐輻射相關(guān)腫瘤治療預(yù)測(cè)。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞化療耐藥性的標(biāo)志物的應(yīng)用，其特征在于，所述化療藥物包括但不限于N-甲基-N-硝基-N-亞硝基胍或依托泊苷。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種預(yù)測(cè)腫瘤細(xì)胞化療耐藥性的標(biāo)志物的應(yīng)用，其特征在于，在于以SirT7-S288位點(diǎn)磷酸化作為腫瘤抑制劑藥物的靶點(diǎn)，以及以SirT7-S288作為腫瘤治療的分子靶點(diǎn)。

9.一種腫瘤耐藥或耐輻射相關(guān)的ELISA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權(quán)利要求2或3任一項(xiàng)所述SirT7-S288特異性磷酸化抗體，以及封閉液、二抗、顯色液和緩沖液。

10.一種核酸，其特征在于，所述核酸編碼由編碼權(quán)利要求3～5任一項(xiàng)所述合成肽的堿基序列組成，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。