[發明專利]一種尿多酸肽注射液中小分子多肽的分子量及分子量分布的檢測方法

有效

• 申請號: 202011528064.0
• 申請日: 2020-12-22
• 公開（公告）號: CN112505226B
• 公開（公告）日: 2022-11-11
• 發明（設計）人: 王金煥;朱峰妍;王華娟;辛妮
• 申請（專利權）人: 南京海納醫藥科技股份有限公司;南京海納制藥有限公司;南京一諾醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 南京思拓知識產權代理事務所(普通合伙) 32288
• 代理人: 呂鵬濤

本發明涉及一種尿多酸肽注射液中小分子多肽的分子量及分子量分布的檢測方法，分別以細胞色素C、胰島素、胸腺五肽和還原型谷胱甘肽作為對照品，采用高效液相色譜法和示差檢測器進行檢測，通過GPC軟件計算回歸方程，再將尿多酸肽注射液制成供試品溶液，按照相同的色譜條件進行測定，由GPC軟件分析尿多酸肽注射液中小分子多肽的分子量及分子量分布，其色譜條件包括：色譜柱為Sepax Zenix SEC?100；以乙腈、水和三氟乙酸的混合溶液作為混合流動，其中，乙腈、水和三氟乙酸的體積比為50～60:40～50:0.2。采用本發明的方法可以準確測定樣品中分子量在5000D以下的小分子多肽，專屬性好、分離度高。

技術領域

本發明屬于化學藥物分析方法技術領域，具體涉及一種尿多酸肽注射液中小分子多肽的分子量及分子量分布的檢測方法。

背景技術

尿多酸肽注射液(Uroacitides Injection)，本品規格為每瓶100ml，由合肥永生制藥有限公司研制，于2016年批準上市，按照《藥品注冊管理辦法》規定，屬于未在國內外上市銷售的一類新藥。

尿多酸肽注射液從正常人尿中提取并經純化制得，含有能夠促進癌細胞走向良性分化的多組分混合物，主要為馬尿酸、苯乙酸、吲哚乙酸、苯乙酰谷氨酰胺和小分子多肽，通過多組分的共同作用，發揮抗癌效果。目前主要用于非小細胞肺癌、原發性肝癌及乳腺癌的臨床治療。

尿多酸肽注射液中小分子多肽是誘導分化作用的主要物質，因此需要建立合適的分析方法對樣品中分子量及分子量分布進行研究，達到對尿多酸肽注射液中小分子多肽準確、有效的檢測和監控。

發明內容

本發明的目的是在現有技術的基礎上，提供一種尿多酸肽注射液中小分子多肽的分子量及分子量分布的檢測方法，專屬性好、分離度高，可以準確測定樣品中分子量在5000D以下的小分子多肽。

本發明的技術方案如下：

一種尿多酸肽注射液中小分子多肽的分子量及分子量分布的檢測方法，分別以細胞色素C、胰島素、胸腺五肽和還原型谷胱甘肽作為對照品配制四種對照品溶液，采用高效液相色譜法和示差檢測器進行檢測，以對照品保留時間為橫坐標，分子量的log值為縱坐標，通過GPC軟件計算回歸方程，再將尿多酸肽注射液配置成供試品溶液，按照相同的色譜條件進行測定，由GPC軟件分析尿多酸肽注射液中小分子多肽的分子量及分子量分布，其色譜條件包括：以親水性球型高聚物為填充劑，色譜柱為Sepax Zenix SEC-100；以乙腈、水和三氟乙酸的混合溶液作為混合流動相進行等度洗脫，其中，乙腈、水和三氟乙酸的體積比為50～60:40～50:0.2。

采用本發明的檢測方法，在色譜分析的過程中，采用細胞色素C、胰島素、胸腺五肽和還原型谷胱甘肽作為對照品。在一種優選方案中，四種對照品的重均分子量如下：細胞色素C的重均分子量為12384；胰島素的重均分子量為5777；胸腺五肽的重均分子量為679；還原型谷胱甘肽的重均分子量為307。

采用本發明的檢測方法，可以檢測尿多酸肽注射液中分子量在5000D以下的小分子多肽，專屬性好、分離度高。

對于本發明的檢測方法而言，對色譜柱和混合流動相的要求比較高。在經歷了大量的探索實驗之后，本發明人最終確定以親水性球型高聚物為填充劑，Sepax Zenix SEC-100作為色譜柱，以體積比為50～60:40～50:0.2的乙腈、水和三氟乙酸的混合溶液作為混合流動相，可以準確測定樣品中分子量在5000D以下的小分子多肽，專屬性好、分離度高。在相同的色譜條件下，采用其他色譜柱，例如，以TSK凝膠色譜柱(TSK-GEL G2000 SW色譜柱)進行檢測時，樣品溶液分離效果差，對照品溶液不成線性。

在相同的色譜條件下，即使流動相中均包含相同的組分，也需要嚴格控制流動相中乙腈、水和三氟乙酸的配比，否則，在色譜分析時，也會出現對照品不出峰或線性差，分離效果不佳的問題。