[發明專利]一種基于改性纖維富集的抗痛風藥物篩選方法

在審

• 申請號: 202011525792.6
• 申請日: 2020-12-22
• 公開（公告）號: CN112748209A
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發明（設計）人: 陶益;陳林;江恩賜;朱菲
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: G01N30/72
• 分類號: G01N30/72
• 代理公司: 杭州之江專利事務所(普通合伙) 33216
• 代理人: 朱楓

1.一種基于改性纖維富集的抗痛風藥物篩選方法，其特征在于：包括以下步驟：利用聚多巴胺和聚乙烯亞胺對聚偏二氟乙烯纖維表面進行仿生改性，靶標鍵合在聚乙烯亞胺表面，將靶標鍵合纖維和藥用植物提取物混合、孵育；孵育結束后先用PBS緩沖液清洗，再用變性清洗液進行變性洗脫，然后對變性洗脫物進行液質分析，獲取靶標結合物的相關信息，從藥用植物中分離獲取特異性結合配體。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：變性清洗液為乙腈水溶液或甲醇水溶液。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：孵育結束后，先用PBS緩沖液清洗3次，變性清洗液為體積濃度70％的甲醇水溶液。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：將靶標鍵合纖維和待篩選的藥用植物提取物在35℃下孵育20min。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：將靶標鍵合纖維和藥用植物提取物混合，加入PBS緩沖液，使溶液的離子強度為333-337mM，pH在6.7-6.9進行孵育。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)取一定數量的纖維，浸入Tris-HCl緩沖液中超聲半小時，活化纖維表面；

(2)取步驟(1)得到的活化纖維，加入聚多巴胺溶液，震蕩混合均勻，攪拌過夜后洗滌三次，再先后在聚乙烯亞胺和黃嘌呤氧化酶的磷酸鹽緩沖液中懸浮攪拌一段時間，清洗數次，得到黃嘌呤氧化酶鍵合纖維；

(3)取車前草藥材，加入沸水回流提取，得提取液，過濾，取濾液，離心，取上清液，得車前草粗提物，備用；

(4)取車前草粗提物，插入步驟(2)制備得到的黃嘌呤氧化酶鍵合纖維，加入PBS緩沖液，放在振蕩器上混勻，溶液的離子強度為333-337mM，pH值為6.7-6.9，在35℃下孵育20min，然后將黃嘌呤氧化酶鍵合纖維拔出并用12mL孵育緩沖液洗滌3次，再用2mL 70％甲醇-水溶液變性洗脫，洗脫液進行液質分析和表面等離子共振分析。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：液質分析的參數為ESI負離子模式。