[發(fā)明專利]一種夾心免疫試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011524278.0
• 申請(qǐng)日: 2020-06-19
• 公開（公告）號(hào): CN113820501A
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 熊良鐘;熊清爵;李慶海;張茂峰;熊孟智;王梓光;張超衛(wèi);顏亞偉;曹珍利
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 亳州市新健康科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/74
• 分類號(hào): G01N33/74;G01N33/68;G01N33/577;G01N33/573;G01N33/543;G01N21/65
• 代理公司: 北京恒律知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11416
• 代理人: 王琦;龐立巖

1.一種夾心免疫試劑盒，其特征在于，所述夾心免疫試劑盒包括：10ml頂層試劑、10ml底層試劑、10mlBSA溶液和10mLEDTA抗凝劑；

所述頂層試劑包括：金核銀殼納米棒底物、半胱胺修飾分子、戊二醛修飾分子和1×PBS緩沖液；

所述底層試劑包括：金核銀殼納米棒底物、3-巰基-1,2,4-三氮唑拉曼檢測分子、戊二醛功能修飾分子；

所述BSA溶液的濃度為1％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述夾心免疫試劑盒，其特征在于，所述夾心免疫檢測試劑盒的制備方法包括：

(1)制備頂層試劑

(1.1)將2μL濃度為5mmol/L的3-巰基-1,2,4-三氮唑乙醇溶液加入到金核銀殼納米棒溶液中，溫和搖動(dòng)2h，在7000rpm條件下離心10min，去上清液，得到混合物一；

(1.2)將混合物一分散到去離子水中，加入2μL濃度為25％wt的戊二醛溶液，溫和搖動(dòng)1.5h，在6000rpm條件下離心10min，得到混合物二；

(1.3)將混合物二分散到1.0mL濃度為9.0μg/mL in 1×PBS buffer的抗人肌紅蛋白多克隆抗體溶液中得到混合溶液，將混合溶液在4℃條件下保存12h，然后在6000rpm條件下離心10min，去上清液，將沉淀分散到1mL1×PBS緩沖液中，得到頂層試劑，在4℃的條件下保存；

(2)制備底層試劑

(2.1)將2μL濃度為25mmol/L的半胱胺溶液加入到1.0mL金核銀殼納米棒溶液中，對(duì)其進(jìn)行氨基功能化處理，處理后用純凈水沖洗，氮?dú)飧稍铮?/p>

(2.2)再加入2μL濃度為25mmol/L的戊二醛溶液對(duì)其進(jìn)行功能化處理，處理后用純凈水沖洗，氮?dú)飧稍铮?/p>

(2.3)將步驟2.2中得到的產(chǎn)物加入到2mL濃度為20μg/mL in 1×PBS buffer的抗人肌紅蛋白單克隆抗體溶液中，在4℃下培育12小時(shí)，然后用純凈水沖洗，氮?dú)飧稍铩?/p>

3.一種利用權(quán)利要求1或2所述的夾心免疫試劑盒檢測肌紅蛋白抗原的方法，其特征在于，所述方法包括：

(a)阻斷非特異性結(jié)合

將底層試劑浸入BSA溶液中1h，阻斷非特異性結(jié)合活性位點(diǎn)，然后用純凈水沖洗，氮?dú)飧稍铮?/p>

(b)固定人肌紅蛋白

向步驟(a)處理后的2份底層試劑中分別滴加入200μL測試樣品和空白樣品，在溫室中培育1h，然后用純凈水沖洗，氮?dú)飧稍铮?/p>

(c)形成夾心結(jié)構(gòu)

步驟(b)氮?dú)飧稍锖螅尤腠攲釉噭跍厥抑?0min，培育完成后用純凈水沖洗，再用氮?dú)飧稍铮玫綂A心結(jié)構(gòu)；

(d)光譜采集

以785nm激光為激發(fā)光源，使用20倍物鏡在徠卡顯微鏡上對(duì)上述2份樣品進(jìn)行拉曼光譜采集，光譜在800-1800cm-1范圍內(nèi)，曝光10s。