[發明專利]一種利用魷魚軟骨制備硫酸軟骨素的方法

在審

• 申請號: 202011523667.1
• 申請日: 2020-12-22
• 公開（公告）號: CN112625147A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 吳文惠;楊勁峰
• 申請（專利權）人: 榮成萬盈水產科技有限公司
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08
• 代理公司: 濟南日新專利代理事務所(普通合伙) 37224
• 代理人: 李科偉

本發明公開了一種利用魷魚軟骨制備硫酸軟骨素的方法，其解決提取硫酸軟骨素的傳統方法存在提取工藝復雜、產品得率低、蛋白含量高于5%的問題。其經過以下工藝步驟：1）硫酸軟骨素裂解酶制備；2）魷魚軟骨酶解；3）純化；4）干燥。其是以魷魚軟骨為原料，通過鴨小腸提取硫酸軟骨素裂解酶，并應用于魷魚軟骨酶解制備硫酸軟骨素，發酵產物經醇?鹽第一次純化，聯合膜?電場第二次純化，干燥獲得本發明產品。本發明采用生物法和聯合純化法，提取率高、生物活性強，制備的硫酸軟骨素主要是硫酸軟骨素C。本發明工藝流程簡單高效，易控制，利于大規模推廣生產。

技術領域

本發明涉及硫酸軟骨素的制備，尤其是一種利用魷魚軟骨制備硫酸軟骨素的方法。

背景技術

魷魚加工常伴有大量副產物生成，包括軟骨、內殼等，這些下腳料很少被利用，除部分加工成魚粉或飼料外，因其易腐爛、變質而作垃圾處理，造成了資源的浪費。研究表明，魷魚軟骨主要成分有蛋白質和硫酸軟骨素，其中軟骨素為生物醫藥產品，具有降血脂、預防血管硬化等多種活性。因此，加強綜合利用，變廢為寶，可有效提升其附加值，同時減少廢棄物處理的成本，推進了魷魚加工的發展。因魷魚軟骨來源廣，是一種較為理想的硫酸軟骨素新來源。

硫酸軟骨素是糖胺聚糖，目前采用傳統的堿法、酶法、中性鹽法、堿-鹽法、乙酸抽提法、稀堿-酶法等提取硫酸軟骨素，尚存在提取工藝復雜、產品得率低、蛋白含量高于5%等缺陷。目前，未見利用酶解結合電純化制備硫酸軟骨素的報道。

發明內容

為了克服提取硫酸軟骨素的傳統方法存在提取工藝復雜、產品得率低、蛋白含量高于5%的不足，本發明的目的在于提供一種利用魷魚軟骨制備硫酸軟骨素的方法。本發明采用生物法和聯合純化法，提取率高、生物活性強，制備的硫酸軟骨素主要是硫酸軟骨素C，工藝流程簡單高效，易控制，利于大規模推廣生產。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種利用魷魚軟骨制備硫酸軟骨素的方法，其特征在于，其經過以下工藝步驟：

1）硫酸軟骨素裂解酶制備

a.取新鮮鴨小腸，用破壁機粉碎，按重量份1:5-6添加無菌水制備鴨小腸溶液，攪拌10-20min，用160-180目篩子過濾，然后取濾液涂布培養基，進行平板培養分離，接著挑取單菌落，用斜面劃線方法純化；配制含有魷魚軟骨粉末的培養基，將純化后的單菌落點種于培養基平板，30℃-37℃恒溫培養1-3天，向平板中倒入無菌水，浸泡3-5min；挑取產生透明圈的菌株，利用斜面劃線培養，控制溫度保持在30℃-37℃，120-150r/min振蕩好氧培養1-3天；培養完成后，接種于液體培養基中進行生產菌的培養，在溫度30-37℃、120-150r/min振蕩通氣培養1-3天，菌體密度為1×10⁸ - 5×10⁸個/ml時，即得硫酸軟骨素裂解酶產生菌種子菌液；

b. 按4-6%v/v接種量將硫酸軟骨素裂解酶產生菌種子菌液接入發酵罐中，在30℃-37℃發酵培養基，經48-60h發酵，用低溫離心機5℃、4000-5500r/min離心20-30min,取上清液，在冰浴中緩緩向上清液中加入氯化鈉、硫酸銨和乙醇復合物，5℃靜置18-20h，低溫離心機5℃、8000-10000r/min離心25-38min,取沉淀，用去離子水溶解，轉移至透析袋中，透析脫除雜質即得硫酸軟骨素裂解酶；

2）魷魚軟骨酶解

a.取魷魚軟骨，用清水沖洗除雜，晾干后用粉碎機粉碎，加入無水乙醇浸泡2-5h，離心取沉淀，用無水乙醇清洗幾遍，晾干備用；

b.步驟a中備用的魷魚軟骨按重量百分數20%-30%和水混合，按2%-5%混合物重量百分比添加步驟1）b中提取的硫酸軟骨素裂解酶，溫度45-51℃、pH8.5-10、100-120r/min酶解4-6h；

c.酶解完成后，離心除去沉淀，收集上清液并真空濃縮至固形物重量百分含量為30-35%；

3）純化