[發明專利]N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白的應用

有效

• 申請號: 202011523442.6
• 申請日: 2020-12-22
• 公開（公告）號: CN112516288B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 周選圍;胡大衛;徐偉民;李奇璋
• 申請（專利權）人: 西藏阿那達生物醫藥科技有限責任公司
• 主分類號: A61K38/16
• 分類號: A61K38/16;A61K36/074;A61P29/00;A61P37/02;C07K14/375;C12N15/31;C12N15/81;A23L33/185
• 代理公司: 上海交達專利事務所 31201
• 代理人: 王毓理;王錫麟

一種N?糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白的應用，通過抑制p38?MAPK途徑降低促炎性介質的表達，同時提高抗炎性介質的表達，具有更高的生物活性和更低的細胞毒性，并且表現出更顯著的抗炎活性。

技術領域

本發明涉及的是一種生物制藥領域的技術，具體是一種N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白的應用。

背景技術

巨噬細胞作為一種具有可塑性和多能性的細胞群體，在體內外不同的微環境影響下，表現出明顯的功能差異。目前根據活化狀態和發揮功能的不同，巨噬細胞主要可分為M1型即經典活化的巨噬細胞(classicallyactivated?macrop?hage)，和M2型即替代性活化的巨噬細胞(alternativelyactivated?macrophage)。在促炎性細胞因子和病原體相關分子模式(PAMPs)如干擾素γ(IFN-γ)和LPS的應答下引發M1型巨噬細胞。該類型巨噬細胞產生細胞毒性和炎性分子如一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)，促炎性細胞因子如腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素(IL)-1β和IL-6，趨化因子如單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1/CCL-2)，等。M2型巨噬細胞主要針對抗炎性細胞因子、寄生蟲感染和損傷相關分子模式(DAMPs)如IL-4和IL-13的應答，在抑制急慢性炎癥反應和組織修復中具有重要作用。M2型巨噬細胞能夠分泌大量的抗炎性細胞因子如IL-10和轉化生長因子-β(TGF-β)。靈芝免疫調節蛋白是靈芝(Ganoderma?lucidum)中存在的一種生物活性蛋白質，具有免疫調節的功能。現有技術中公開了靈芝免疫調節蛋白能夠激活巨噬細胞，同時促進促炎性和抗炎性介質的產生。然而，促炎性介質往往是誘發慢性炎癥的元兇。

發明內容

本發明針對現有技術存在的上述不足，提出一種N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白的應用，通過抑制p38?MAPK途徑降低促炎性介質的表達，同時提高抗炎性介質的表達。

本發明是通過以下技術方案實現的：

本發明涉及一種N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白的應用，用于制備抗炎性藥物以抑制細胞中p38?MAPK途徑，降低促炎性介質的表達。

所述的N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白的氨基酸序列，如Seq?ID?No.1、Seq?IDNo.2、Seq?ID?No.3所示，優選為：Seq?ID?No.3。

所述的細胞包括小鼠腹腔巨噬細胞RAW264.7。

所述的抗炎性藥物為組合物、營養補充劑、食品添加劑、功能性食品補充劑或功能性飲料的組合物，其包含N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白。

本發明涉及上述N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白的制備方法，基于Seq?IDNo.17所示的靈芝免疫調節蛋白氨基酸序列，參照Seq?ID?No.18所示的畢赤酵母(Pichiapastoris)偏愛密碼子進行基因合成，通過如Seq?ID?No.4～7所示的引物獲得如Seq?ID?No.19所示的N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白N31S基因；或通過如Seq?ID?No.4、Seq?ID?No.8、Seq?ID?No.9、Seq?ID?No.7所示的引物獲得如Seq?ID?No.20所示的獲得N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白T36N基因；或通過如Seq?ID?No.4、Seq?ID?No.5、Seq?IDNo.10、Seq?ID?No.7所示的引物獲得如Seq?ID?No.21所示的獲得N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白N31S/T36N基因。將所述N31S基因、所述T36N基因和所述N31S/T36N基因分別克隆至真核表達載體pPIC9K∷X-His后，分別轉化畢赤酵母GS115，獲得酵母轉化子，最后通過甲醇誘導得到重組蛋白。