[發明專利]N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白的應用

有效

• 申請號: 202011523442.6
• 申請日: 2020-12-22
• 公開（公告）號: CN112516288B
• 公開（公告）日: 2023-04-18
• 發明（設計）人: 周選圍;胡大衛;徐偉民;李奇璋
• 申請（專利權）人: 西藏阿那達生物醫藥科技有限責任公司
• 主分類號: A61K38/16
• 分類號: A61K38/16;A61K36/074;A61P29/00;A61P37/02;C07K14/375;C12N15/31;C12N15/81;A23L33/185
• 代理公司: 上海交達專利事務所 31201
• 代理人: 王毓理;王錫麟

1.一種基于N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白的制備方法，其特征在于，基于Seq?IDNo.17所示的靈芝免疫調節蛋白氨基酸序列，參照Seq?ID?No.18所示的畢赤酵母(Pichiapastoris)偏愛密碼子進行基因合成，通過：

①如Seq?ID?No.4～7所示的引物獲得如Seq?ID?No.19所示的N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白N31S基因；或通過

②如Seq?ID?No.4、Seq?ID?No.8、Seq?ID?No.9、Seq?ID?No.7所示的引物獲得如Seq?IDNo.20所示的獲得N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白T36N基因；或通過

③如Seq?ID?No.4、Seq?ID?No.5、Seq?ID?No.10、Seq?ID?No.7所示的引物獲得如SeqID?No.21所示的獲得N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白N31S/T36N基因；

然后將所述N31S基因、所述T36N基因和所述N31S/T36N基因分別克隆至真核表達載體pPIC9K∷X-His后，分別轉化畢赤酵母GS115，獲得酵母轉化子，最后通過甲醇誘導得到重組蛋白；

所述的N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白，來源于畢赤酵母表達系統，其氨基酸序列，如Seq?ID?No.1、Seq?ID?No.2、Seq?ID?No.3所示；

所述的靈芝免疫調節蛋白取自赤靈芝(Ganoderma?lucidum)、松杉靈芝(Ganodermatsugae)、紫芝(Ganoderma?japoncium)、小孢靈芝(Ganoderma?microsporum)、中國紫芝(Ganoderma?sinensis)、黑靈芝(Ganoderma?atrum)、樹舌靈芝(Ganoderma?applanatum)或擬鹿角靈芝(Ganoderma?amboinense)。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征是，所述的引物具體為：Seq?ID?No.4：5’-ccgccgccggaattcatgtctgacaccgctttgatcttc-3’、Seq?ID?No.5：5’-gaagttagatgggttacctcttccc-3’、Seq?ID?No.6：5’-gggaagaggtaacccatctaacttcatcgacaccgttaccttcccaaag-3’、Seq?ID?No.7：5’-atgatgatggggcccgttccattgagcaatgatgaagtcg-3’、Seq?ID?No.8：5’-gaagttgtttgggttacctcttccc-3’、Seq?ID?No.9：5’-gggaagaggtaacccaaacaacttcatcgacaacgttaccttcccaaag-3’、Seq?ID?No.10：5’-gggaagaggtaacccatctaacttcatcgacaacgttaccttcccaaag-3’。

3.一種根據權利要求1或2所述方法制備得到的N-糖基化修飾之靈芝免疫調節蛋白的應用，其特征在于，用于制備抑制細胞中p38?MAPK途徑、降低促炎性介質的表達的抗炎性藥物。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征是，所述的細胞包括小鼠腹腔巨噬細胞RAW264.7。