[發(fā)明專利]一種靶向MUC1的CAR-T細胞及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011521236.1
• 申請日: 2020-12-21
• 公開（公告）號: CN112522207B
• 公開（公告）日: 2023-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 湯朝陽;請求不公布姓名;秦樂;吳迪;馮世忠;馮嘉昆;楊樂旋
• 申請（專利權(quán)）人: 湯朝陽
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發(fā)明提供了一種靶向MUC1的CAR?T細胞及其應(yīng)用，所述CAR?T細胞表達特異性結(jié)合MUC1抗原的嵌合抗原受體和復(fù)合型IL?6；所述嵌合抗原受體包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、跨膜結(jié)構(gòu)域和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域；所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域為抗MUC1單鏈抗體；所述鉸鏈區(qū)為IgG4?CH3；所述復(fù)合型IL?6為NFAT調(diào)控型過表達。本發(fā)明構(gòu)建條件性表達復(fù)合型IL?6的CAR?T細胞，CAR分子含有IgG4?CH3鉸鏈區(qū)，兩者相互配合、協(xié)同作用，從條件性分泌復(fù)合型IL?6和提高CD4+T細胞比例兩方面，增強了CAR?T的擴增能力和抗腫瘤作用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種靶向MUC1的CAR-T細胞及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

嵌合抗原受體T細胞(Chimeric?antigen?receptor?T?cell，CAR-T)免疫治療是通過在T細胞膜上表達特異性識別并結(jié)合腫瘤抗原的嵌合抗原受體分子，誘導(dǎo)T細胞活化，從而實現(xiàn)對腫瘤細胞特異性殺傷的一種技術(shù)，是最有發(fā)展前景的腫瘤免疫療法之一。目前，CAR-T免疫治療方法在白血病治療領(lǐng)域取得了巨大突破。

盡管CAR-T細胞療法已取得了驚人的療效，但是仍然存在許多阻礙。例如，CAR-T細胞療法存在復(fù)發(fā)率高的問題，促進CAR-T細胞的維持和記憶性T細胞的形成可能是解決該問題的技術(shù)突破口；此外，CAR-T細胞中CD4+和CD8+T細胞的比例對于CAR-T細胞的抗腫瘤活性有很大影響，但是在常規(guī)的體外培養(yǎng)體系中，CD8+T細胞相較于CD4+T細胞具有更明顯的生長優(yōu)勢，體外培養(yǎng)主要獲得CD8+T細胞，CD4+T細胞的比例極低。

因此，為提高CAR-T的治療效果，需要對現(xiàn)有技術(shù)進行進一步改進。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)的不足和實際需求，本發(fā)明提供了一種靶向MUC1的CAR-T細胞及其應(yīng)用，通過條件性表達復(fù)合型IL-6和含有IgG4-CH3鉸鏈區(qū)的嵌合抗原受體，顯著提高了CAR-T數(shù)量和抗腫瘤效果。

為達此目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

第一方面，本發(fā)明提供了一種靶向MUC1的CAR-T細胞，所述CAR-T細胞表達特異性結(jié)合MUC1抗原的嵌合抗原受體和復(fù)合型IL-6；

所述嵌合抗原受體包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)、跨膜結(jié)構(gòu)域和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域；

所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域為抗MUC1單鏈抗體；

所述鉸鏈區(qū)為IgG4-CH3；

所述復(fù)合型IL-6為NFAT調(diào)控型過表達。

本發(fā)明中，采用NFAT調(diào)控啟動子調(diào)控T細胞對復(fù)合型IL-6的表達，配合含有IgG4-CH3鉸鏈區(qū)的嵌合抗原受體，顯著提高了CD4+CAR-T細胞的增殖能力和比例，提高了CAR-T的抗腫瘤效果，同時降低了CAR-T的副作用。

優(yōu)選地，所述IgG4-CH3包括SEQ?ID?NO:1所示的氨基酸序列；

SEQ?ID?NO:1：

GGGSSGGGSGGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK。

優(yōu)選地，所述跨膜結(jié)構(gòu)域包括CD28跨膜結(jié)構(gòu)域和/或CD8α跨膜結(jié)構(gòu)域。

優(yōu)選地，所述信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包括CD28胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域、CD3ζ、TLR2、4-1BB、TLR1、CD27、OX40或DAP10中的任意一種或至少兩種的組合，優(yōu)選為4-1BB和CD3ζ的組合。

優(yōu)選地，所述嵌合抗原受體還包括CD8α信號肽。