[發明專利]一種人工抗原呈遞細胞及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011521175.9
• 申請日: 2020-12-21
• 公開（公告）號: CN112608901A
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 湯朝陽;秦樂;吳迪;馮世忠;馮嘉昆;楊樂旋;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 廣東昭泰體內生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/867;C12N7/01;A61K35/17;A61P35/00;C12R1/93
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供了一種人工抗原呈遞細胞及其制備方法和應用，所述人工抗原呈遞細胞表達膜蛋白MICA、IL?12、CD19和CD86。本發明采用MICA、IL?12、CD19和CD86的組合構建人工抗原呈遞細胞進行重編程NK細胞培養，實現了短時間內培養獲得大量重編程NK細胞的效果，所述重編程NK細胞腫瘤細胞毒性強，在免疫治療領域具有重要的應用前景。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種人工抗原呈遞細胞及其制備方法和應用。

背景技術

近年來細胞免疫療法在癌癥治療中展現出了巨大的潛力，被認為是最有希望攻克癌癥的方法，其中，基于T細胞的免疫治療技術受到了廣泛關注，是目前的研究熱點。然而，主要組織相容性復合體(MHC)極大地限制了T細胞免疫治療的應用范圍。與MHC限制的T細胞不同，NK細胞不需要進行HLA配型，因此可以作為異源性的現貨細胞藥品對病人進行免疫治療，在臨床上具有重要的應用前景。

研究人員也在研究T細胞的激活分化機制，嘗試對其進行基因改造，獲得具有增強的抗腫瘤活性的T細胞。Li等人將小鼠T細胞重編程成為NK樣細胞(induced T-to-naturalkiller cells，ITNK細胞)(Li,P.et al.Reprogramming of T cells to natural killer-like cells upon Bcl11b deletion.Science 329,85-89(2010).)，并于近年采用CRISPR/Cas9技術成功地將人T細胞重編程成為ITNK細胞。

但是NK細胞、重編程NK細胞均面臨著無法持續增殖的問題。在體外實現重編程NK細胞的大規模擴增是亟待解決的關鍵問題。

近年來，使用基因工程技術構建的人工抗原呈遞細胞(滋養層細胞)越來越多地應用于NK細胞的體外擴增。但是重編程NK細胞不同于NK細胞，其具有T細胞和NK細胞雙重功能，目前尚無有效的體外擴增和活化重編程NK 細胞的方法。

發明內容

針對現有技術的不足和實際需求，本發明提供了一種人工抗原呈遞細胞及其制備方法和應用，所述人工抗原呈遞細胞表達多種活化重編程NK細胞的配體，顯著提高了重編程NK細胞的數量和活性。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供了一種人工抗原呈遞細胞，所述人工抗原呈遞細胞表達膜蛋白MICA、IL-12、CD19和CD86。

本發明中，將MICA、IL-12、CD19和CD86表達于K562表面構建人工抗原呈遞細胞，通過與重編程NK細胞表面的受體結合用于活化重編程NK細胞，顯著提高了重編程NK細胞的擴增數量和腫瘤細胞毒性。

優選地，所述IL-12通過與CD28跨膜區形成融合蛋白、表達在所述人工抗原呈遞細胞表面。

優選地，所述MICA包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；

SEQ ID NO:1：

MGLGPVFLLLAGIFPFAPPGAAAEPHSLRYNLTVLSWDGSVQSGFLTEV HLDGQPFLRCDRQKCRAKPQGQWAEDVLGNKTWDRETRDLTGNGKDLRM TLAHIKDQKEGLHSLQEIRVCEIHEDNSTRSSQHFYYDGELFLSQNLETKEWT MPQSSRAQTLAMNVRNFLKEDAMKTKTHYHAMHADCLQELRRYLKSGVV LRRTVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQ WGDVLPDGNGTYQTWVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSGKVLVL QSHWQTFHVSAVAAAAIFVIIIFYVRCCKKKTSAAEGPELVSLQVLDQHPVGTSDHRDATQLGFQPLMSDLGSTGSTEGA。