[發明專利]一種人工抗原呈遞細胞及其制備方法和應用在審
| 申請號： | 202011521175.9 | 申請日： | 2020-12-21 |
| 公開（公告）號： | CN112608901A | 公開（公告）日： | 2021-04-06 |
| 發明（設計）人： | 湯朝陽;秦樂;吳迪;馮世忠;馮嘉昆;楊樂旋;其他發明人請求不公開姓名 | 申請（專利權）人： | 廣東昭泰體內生物醫藥科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/867;C12N7/01;A61K35/17;A61P35/00;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 鞏克棟 |
| 地址： | 510663 廣東省廣州市高新技術產業開發區科學城攬月路*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 人工 抗原 呈遞 細胞 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種人工抗原呈遞細胞，其特征在于，所述人工抗原呈遞細胞表達膜蛋白MICA、IL-12、CD19和CD86。
2.根據權利要求1所述的人工抗原呈遞細胞，其特征在于，所述IL-12通過與CD28跨膜區形成融合蛋白、表達在所述人工抗原呈遞細胞表面。
3.根據權利要求1或2所述的人工抗原呈遞細胞，其特征在于，所述MICA包括SEQ IDNO:1所示的氨基酸序列；
優選地，所述IL-12包括如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列；
優選地，所述CD28跨膜區包括SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；
優選地，所述CD19包括SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列；
優選地，所述CD86包括SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列。
4.一種表達載體，其特征在于，所述表達載體包括MICA編碼基因、IL-12和CD28跨膜區融合蛋白編碼基因、CD19編碼基因和CD86編碼基因。
5.根據權利要求4所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體包括病毒載體；
優選地，所述病毒載體包括慢病毒載體、逆轉錄病毒載體或腺相關病毒載體中的任意一種，優選為慢病毒載體。
6.一種重組慢病毒，其特征在于，所述重組慢病毒采用權利要求4或5所述的表達載體與包裝輔助質粒共轉染哺乳細胞制備得到；
優選地，所述哺乳細胞包括293細胞、293T細胞或293F細胞中的任意一種或至少兩種的組合。
7.一種權利要求1-3任一項所述的人工抗原呈遞細胞的制備方法，其特征在于，所述方法包括將權利要求6所述的重組慢病毒導入K562細胞，利用抗生素和流式細胞儀篩選陽性克隆的步驟。
8.一種培養基，其特征在于，所述培養基包括權利要求1-3任一項所述的人工抗原呈遞細胞；
優選地，所述培養基的培養液包括Eagle培養液、RPMI-1640培養基或Ham’s F-10中的任意一種或至少兩種的組合。
9.一種重編程NK細胞的培養方法，其特征在于，所述培養方法包括采用權利要求8所述的培養基培養重編程NK細胞的步驟；
優選地，所述培養方法還包括對重編程NK細胞進行輻照的步驟；
優選地，所述輻照的劑量為50～500Gy；
優選地，所述重編程NK細胞的制備方法為將靶向Bcl11b基因的CRISPR/Cas9質粒電轉入活化的T細胞制備得到。
10.一種重編程NK細胞，其特征在于，所述重編程NK細胞采用權利要求9所述的培養方法培養得到。
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