[發明專利]一種防脫毛狗糧及其制備方法

在審

• 申請號: 202011519992.0
• 申請日: 2020-12-21
• 公開（公告）號: CN112640987A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 劉艷
• 申請（專利權）人: 劉艷
• 主分類號: A23K10/12
• 分類號: A23K10/12;A23K10/30;A23K10/20;A23K20/158;A23K20/163;A23K10/16;A23K10/37;A23K40/00;A23K50/42;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 鹽城眾創睿智知識產權代理事務所(普通合伙) 32470
• 代理人: 韓燕

1.一種防脫毛狗糧，其特征在于：包括玉米芯、成熟粗毛纖孔菌子實體粉沫、豬肉糜、起酥油、白砂糖和水的植物乳桿菌與富硒酵母菌共同復合發酵的骨頭型餅干。

2.根據權利要求1所述的一種防脫毛狗糧，其特征在于：所述玉米芯是經過粗毛纖孔菌發酵降解7-10天的玉米芯。

3.根據權利要求1所述的一種防脫毛狗糧，其特征在于：所述成熟粗毛纖孔菌子實體粉沫是含有金針菇真菌免疫調節蛋白的基因工程成熟粗毛纖孔菌子實體粉沫。

4.一種防脫毛狗糧的制備方法，包括以下具體步驟：

步驟一：取低筋面粉，加適量水，富硒酵母攪拌制得面團，靜置于28-32℃、濕度60％的醒發箱內發酵3-4h，獲得一次發酵面團；

步驟二：取豬肉糜，添加成熟粗毛纖孔菌子實體粉沫，利用植物乳桿菌30℃厭氧攪拌發酵2-4h，獲得乳酸發酵豬肉糜；

步驟三：將步驟二獲得的乳酸發酵豬肉糜、起酥油、白砂糖、成熟粗毛纖孔菌子實體粉沫加入到步驟一獲得的一次發酵面團中，攪拌均勻，靜置于溫度35℃、濕度70％的醒發箱內發酵3-6h，獲得餅干成型面團；

步驟四：發酵完成的面團用壓片機壓至2mm厚，并包裹在玉米芯外部，制成骨頭形狀，在上火180℃、下火160℃下烘烤15min，冷卻后得到狗糧餅干的成品。

5.根據權利要求4所述的一種防脫毛狗糧的制備方法，其特征在于：所述步驟三中材料的質量配比：乳酸發酵豬肉糜3-5份、起酥油0.5-1.5份、白砂糖0.1-0.5份、成熟粗毛纖孔菌子實體粉沫0.2-0.8份、一次發酵面團10-25份。

6.根據權利要求4所述的一種防脫毛狗糧的制備方法，其特征在于：所述成熟粗毛纖孔菌子實體粉沫的制備：通過RT-PCR方法從金針菇體內獲得真菌免疫調節蛋白(FIP)cDNA序列，我們在FIP的C端添加His標簽，方便蛋白的純化；利用限制性內切酶EcoR I、BamHI酶雙酶切，T4DNA連接酶連接，構建了植物雙元表達載體p139035S-FIP,并將重組質粒轉入到根癌農桿菌EHA05中。

7.根據權利要求6所述的一種防脫毛狗糧的制備方法，其特征在于：所述根癌農桿菌EHA05通過凝膠電泳檢測，發現條帶與目標基因大小一致，說明重組質粒已經轉移到根癌農桿菌EHA05體內；以粗毛纖孔菌菌絲球為受體材料，根癌農桿菌EHA05的菌液濃度OD600為0.5，侵染時間20-40min，在乙酞丁香酮為200μmol/L的共培養基上共培養72h。

8.根據權利要求7所述的一種防脫毛狗糧的制備方法，其特征在于：所述基因工程粗毛纖孔菌通過PCR與Southern雜交結果表明免疫球蛋白基因已整合到粗毛纖孔菌的基因組中，在無選擇壓力的PDA固體培養基上繼代培養五次后仍檢測到基因的存在,表明基因在轉基因粗毛纖孔菌中可穩定遺傳，獲得高真菌免疫調節蛋白表達的粗毛纖孔菌菌絲體。

9.根據權利要求8所述的一種防脫毛狗糧的制備方法，其特征在于：所述基因工程粗毛纖孔菌擴大培養：培養基質量比木屑3-5份，稻殼2-3份，玉米粉10-15份，木糖0.5-1份，酵母浸粉0.8-2份，石灰0.5-0.8份，石膏0.5-1.2份，與40-70份水混合攪拌均勻，包裹在玉米芯外部，培養9-12天，轉移到60份木屑上繼續培養15-20天，培育出子實體。

10.根據權利要求9所述的一種防脫毛狗糧的制備方法，其特征在于：所述玉米芯發酵后切割制成長10-15cm，巴氏消毒備用；成熟基因工程粗毛纖孔菌子實體清洗后，低溫干燥并研磨成粉沫備用。