[發明專利]一種甲鈷胺顆粒有關物質的測定方法

在審

• 申請號: 202011515547.7
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN112697936A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 鈕翠然;張瑩;肖麗靜;錢凌燕;蘇津津
• 申請（專利權）人: 卓和藥業集團有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 北京商專潤文專利代理事務所(普通合伙) 11317
• 代理人: 蘇霞

1.一種甲鈷胺顆粒有關物質的測定方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)供試品溶液的制備：取適量甲鈷胺顆粒置于量瓶中，加入流動相A振搖使其溶解、稀釋，制成濃度為0.1mg/ml的溶液；搖勻、離心，取上清液作為供試品溶液；

(2)對照品溶液的制備：取適量甲鈷胺和羥鈷胺對照品，加流動相A超聲使其溶解，稀釋，制成濃度為1ug/ml的對照品溶液；

(3)靈敏度溶液的制備：取適量對照品溶液置于量瓶中，加流動相A稀釋，制成濃度為0.05ug/ml的靈敏度溶液；

(4)采用高效液相色譜測定有關物質的含量，具體為：

將步驟(3)制得的靈敏度溶液注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，再精密量取供試品溶液和對照品溶液分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

2.根據權利要求1所述的測定方法，其特征在于，步驟(4)中色譜條件為：固定相是以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱，流動相包括流動相A和流動相B，流動相A由磷酸鹽緩沖液和乙腈組成，流動相B由乙腈和水組成；檢測波長為300-360nm，進樣量為100μl，柱溫為40℃，流速為0.5-1.5ml/min；以及采用梯度洗脫。

3.根據權利要求2所述的測定方法，其特征在于，檢測波長為342nm，流速為1.0ml/min。

4.根據權利要求3所述的測定方法，其特征在于，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.01-0.05mol/L，PH值為3.5-5.0。

5.根據權利要求3所述的測定方法，其特征在于，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.03mol/L，PH值為4.5。

6.根據權利要求4或5所述的測定方法，其特征在于，所述磷酸鹽緩沖液選自磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫胺、磷酸氫二胺中的一種或幾種。

7.根據權利要求6所述的測定方法，其特征在于，所述磷酸鹽緩沖液選自磷酸二氫鉀。

8.根據權利要求7所述的測定方法，其特征在于，流動相A由0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液與乙腈按照體積比90：10的比例混合而成，流動相B是由乙腈與水按照體積比90：10的比例混合而成。

9.根據權利要求7所述的測定方法，其特征在于，梯度洗脫的過程為：于0-6分鐘，流動相中A的體積占100％，流動相B的體積占0；于6-30分鐘，流動相中A的體積從100％變化為92％，流動相B的體積從0變化為8％；于30-40分鐘，流動相中A的體積從92％變化為100％，流動相B的體積從8％變化為0％。