[發明專利]一種花青素的檢測方法

在審

• 申請號: 202011515048.8
• 申請日: 2020-12-21
• 公開（公告）號: CN112730656A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 張協光;彭祖茂;肖偉敏;邢萌茹;嚴虞虞;鄧夢雅;李意;楊國武
• 申請（專利權）人: 深圳市計量質量檢測研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 深圳市恒和大知識產權代理有限公司 44479
• 代理人: 賴燦彬

本發明提供了一種花青素的檢測方法，包括如下步驟：配制測試溶液：配置總濃度為500μg/mL的被測花青素溶液，作為被測試溶液；測定：采用反相色譜法對被測試溶液進行洗脫，聯合高分辨質譜進行檢測，超高效液相色譜條件為：色譜柱為十八烷基鍵合硅膠柱，柱溫為25℃，注入量為2μl,質譜掃描范圍為m/z：100～1000；流動相的條件為：有機相為含1％甲酸的甲醇，水相為1％甲酸水溶液，梯度洗脫，流速0.3mL/min。本發明所述的檢測方法能讓12種花青素全部基線分離，達到所有花青素全檢測的目的。且本發明是采用超高效液相和高分辨質譜聯用，雙通道檢測保證檢測的準確度，高分辨率和好的分離度使得檢測精度提升，大大降低了檢測限。

技術領域

本發明屬于化學分析技術領域，特別涉及一種花青素的檢測方法。

背景技術

花青素(anthocyanidin)屬黃酮類化合物，是廣泛存在于植物中的水溶性 天然色素，具有很高的營養價值?；ㄇ嗨匾蚱滟Y源豐富和安全無毒，同時擁有 一定的營養和藥用價值，在食品，醫藥、化妝品等方面擁有較大的發展市場。 目前，國內有關花青素的研究主要集中在尋找花青素含量豐富的植物原料，從 中提取花青素并投入到商業生產，開拓花青素應用市場。已投入商業生產的有 葡萄皮色素、漿果類色素(草莓、楊梅、枸杞、藍莓)和紫薯色素等。

目前，我國在花青素檢測方面尚未形成強制性標準文件，然而花青素成分 復雜多變，現有研究方法干擾大，檢測組分少，導致花青素質量控制存在一定 困難。目前檢測方法主要有紫外分光光度法、高效液相色譜法和高效液相色譜 法/質譜聯用法。紫外分光光度法常用于花青素總量的檢測，依據花青素在不同 pH條件下會發生顏色變化原理：在pH＝1.0時，氧鎓離子形式占主導，變成紅 色；當pH＝4.5時，主要存在半縮酮形式，顏色消失，在520nm下的吸光度與 試樣中花青素濃度成正比，以測定花青素含量。紫外分光光度法是一種操作簡 單，最經濟的分析手段，但是用于花青素檢測往往受溶劑pH值、環境溫度等 外在條件影響，同時也會受樣品中原花青素和花白素等物質的干擾，分析結果 往往偏高，靈敏度低?；ㄉ赵谒嵝詶l件下可水解生成天竺葵、矢車菊素、飛 燕草素、芍藥色素、矮牽牛色素和錦葵色素苷元，國內推薦檢測方法主要以高 效液相色譜法檢測該6種花色素苷元以定量樣品中花青素含量；但是，由于強 酸性的前處理條件，導致檢測會受前花青素等物質的影響，結果偏高。自然界 中花青素多以花色苷形式存在，主要有花翠素(飛燕草)-3-O-葡萄糖苷 (Dp-3-O-Glu)、矢車菊素-3-O-葡萄糖苷(Cy-3-O-Glu)、矮牽牛素-3-O-葡萄糖苷(Pt-3-O-Glu)、天竺葵-3-O-葡萄糖苷(Pg-3-O-Glu)、芍藥素-3-O-葡萄糖苷 (Pn-3-O-Glu)和錦葵素-3-O-葡萄糖苷(Ma-3-O-Glu)六種。分析樣品中6種花色苷 和6種花色素能更加具體的反映樣品中花青素含量。雖然高效液相色譜法是一 種分析花色苷及花色素，簡單、經濟的方法，但是受色譜柱、流動相及檢測器 的影響，多種花色苷及花色素在色譜圖上無法實現基線分離，現有的反相液相 色譜紫外檢測器法也只能同時分析8種花色苷和花色素。離同時檢測12種花青 素的檢測目的還是有一定差距。

隨著花青素的應用日漸規?；?，精細化，找到一種更精確的檢測分離各種 花青素的方法是十分必要的。

發明內容

本發明的目的在，提供一種花青素的檢測方法，以解決現有的花青素的檢 測方法無法實現全種類花青素檢測的技術問題。

為了解決所述技術問題，本發明提供了一種花青素的檢測方法，包括如下 步驟：

配制測試溶液：配置總濃度為500μg/mL的被測花青素溶液，作為被測試 溶液；

測定：采用反相色譜法對被測試溶液進行洗脫，聯合高分辨質譜進行檢測， 超高效液相色譜條件為：色譜柱為十八烷基鍵合硅膠柱，柱溫為25℃，注入 量為2μl,質譜掃描范圍為m/z：100～1000；

流動相的條件為：有機相為含1％甲酸的甲醇，水相為1％甲酸水溶液，梯度 洗脫，流速0.3mL/min。