[發(fā)明專利]一種病毒核酸提取試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011510148.1
• 申請(qǐng)日: 2020-12-18
• 公開（公告）號(hào): CN112442498B
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林博楠;白璐璐;高祥輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 洛陽愛森生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 洛陽公信知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 41120
• 代理人: 王海龍

本發(fā)明涉及一種病毒核酸提取試劑盒，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，包括裂解液、結(jié)合液、洗滌液、洗脫液和納米磁珠；所述裂解液的pH值為5.0～7.5，包括異硫氰酸胍、鹽酸胍、檸檬酸三鈉和Tween20；所述結(jié)合液的pH為6.5?6.8，包括聚乙二醇和氯化鈉；所述洗滌液的pH為7.0?7.2，包括Tris?Hcl、無水乙醇、PVP和十六烷基三甲基溴化銨；所述洗脫液的pH值為8.0～8.5，包括Tris?Hcl和EDTA二鈉。本發(fā)明采用二氧化硅磁性微球與羧基微球在一定比例下混合的納米磁珠進(jìn)行核酸提取，在合適的裂解液、結(jié)合液、洗滌液及洗脫液配合下，顯著提高提取效率，增加特異性吸附，使后續(xù)檢測(cè)結(jié)果更加穩(wěn)定、可靠。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種病毒核酸提取試劑盒。

背景技術(shù)

冠狀病毒是一個(gè)大型病毒家族，已知可引起感冒以及中東呼吸綜合征（MERS）和嚴(yán)重急性呼吸綜合征（SARS）等較嚴(yán)重疾病。新型冠狀病毒（COVID-19）是以前從未在人體中發(fā)現(xiàn)的冠狀病毒新毒株，該病毒癥狀一般為發(fā)熱、乏力、干咳，逐漸出現(xiàn)呼吸困難，嚴(yán)重者表現(xiàn)為急性呼吸窘迫綜合征，膿毒癥休克，難以糾正的代謝性酸中毒和凝血功能障礙。該病毒已確認(rèn)存在人傳人現(xiàn)象，病毒潛伏期最短有 1 天發(fā)病，一般潛伏期在 14 天以內(nèi)， 并且在潛伏期已具有傳染性，所致疾病目前沒有特異治療方法。新型冠狀病毒感染肺炎出現(xiàn)了輕癥感染者和“隱形病人”。這些患者本身或癥狀較輕不易引起重視或沒有癥狀，但處在潛伏期和隱性感染期，均可能傳播病毒。但在密切接觸者中，已觀察到一些無癥狀的感染者，雖然沒有癥狀，但是做核酸檢測(cè)是陽性。疑似病例特別是隱性感染者得到精準(zhǔn)快速的診斷，通過快速篩查分流，切斷傳播源，防范交叉感染，是控制疫情的關(guān)鍵。但大部分醫(yī)療機(jī)構(gòu)每天能夠進(jìn)行核酸提取及檢測(cè)的數(shù)量只有數(shù)百人份，核酸提取、檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)，導(dǎo)致疑似病例篩查、分流和確診周期長(zhǎng)，進(jìn)一步增加了交叉感染機(jī)會(huì)。

實(shí)驗(yàn)室檢查在鼻咽拭子、痰液、下呼吸道分泌物、血液等標(biāo)本中可檢測(cè)出病毒核酸， 確診依據(jù)之一為呼吸道標(biāo)本或血液標(biāo)本實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR 檢測(cè)COVID-19 核酸陽性。檢測(cè)流程：采集樣本-核酸提取-核酸檢測(cè)-判定結(jié)果。

核酸提取流程耗時(shí)較長(zhǎng)， 操作相對(duì)繁瑣，更為重要的是，由于 COVID-19 傳染性極強(qiáng)，因此在核酸檢測(cè)整個(gè)過程安全性問題尤為重要，醫(yī)務(wù)人員在頻繁接觸樣本過程中會(huì)增加病毒感染風(fēng)險(xiǎn)，已有報(bào)道檢驗(yàn)人員疑因?qū)嶒?yàn)過程中氣溶膠感染 COVID-19。

傳統(tǒng)的核酸提取方法主要有酚氯仿法和離心柱法。酚氯仿法，成本低廉， 使用了苯酚、氯仿等試劑，毒性較大，長(zhǎng)時(shí)間操作對(duì)人員健康有較大影響，核酸的回收率較低，純度較差，損失量較大 ，操作體系大，不同實(shí)驗(yàn)人員操作重復(fù)性差，不利于保護(hù)DNA/RNA， 很難進(jìn)行微量化的操作。離心柱法，無法同時(shí)處理多個(gè)樣本，需反復(fù)離心，不斷開蓋，不利于實(shí)現(xiàn)高通量、自動(dòng)化操作，特別在大規(guī)模疫病篩查、環(huán)境樣本監(jiān)測(cè)、疫病檢測(cè)等應(yīng)用場(chǎng)景，樣本量較多時(shí)，該方法有其明顯的局限性，上百個(gè)樣本的提取需要耗費(fèi)大量的時(shí)間和人力，同時(shí)很容易因?yàn)槿藛T操作失誤和疲勞造成核酸提取環(huán)節(jié)的失敗，操作過程繁瑣，影響核酸提取效率，需要大量的操作人員及儀器設(shè)備。

目前國(guó)內(nèi)外比較先進(jìn)的核酸提取技術(shù)主要采用磁珠法，國(guó)內(nèi)外各企業(yè)采用的磁珠制備工藝、試劑盒組分、核酸提取儀技術(shù)等各有不同，但都普遍存在以下問題：核酸提取效率低、所提取核酸的完整性差、純度方面也不理想。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種病毒核酸提取試劑盒。采用二氧化硅磁性微球與羧基微球在一定比例下混合的納米磁珠進(jìn)行核酸提取，在合適的裂解液、結(jié)合液、洗滌液及洗脫液配合下，顯著提高提取效率，增加磁珠的特異性吸附，使后續(xù)檢測(cè)結(jié)果更加穩(wěn)定、可靠。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的具體方案為：

一種病毒核酸提取試劑盒，包括裂解液、結(jié)合液、洗滌液、洗脫液和納米磁珠；