[發(fā)明專利]一種病毒核酸提取試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011510148.1
• 申請(qǐng)日: 2020-12-18
• 公開（公告）號(hào): CN112442498B
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林博楠;白璐璐;高祥輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 洛陽(yáng)愛森生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 洛陽(yáng)公信知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 41120
• 代理人: 王海龍

1.一種病毒核酸提取試劑盒，其特征在于：包括裂解液、結(jié)合液、洗滌液、洗脫液和納米磁珠；

所述裂解液的pH值為5.0～7.5，包括1～3mM的異硫氰酸胍、2～4M的鹽酸胍、100～200mM的檸檬酸三鈉和體積分?jǐn)?shù)為2%～4%的Tween20；

所述結(jié)合液的pH為6.5-6.8，包括150-180mmol/L的聚乙二醇4000和0.45-0.52mol/L的氯化鈉；

所述洗滌液的pH為7.0-7.2，包括10～15mM的Tris-Hcl、體積百分?jǐn)?shù)為30%～50%的無水乙醇、質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)為0.1-0.5%的PVP和35-40mM的十六烷基三甲基溴化銨；

所述洗脫液的pH值為8.0～8.5，包括10～30mM的Tris-Hcl，0. 05-0.08mM的EDTA二鈉；

所述納米磁珠的制備方法，包括以下步驟：

步驟一、向納米氧化鐵磁珠分散液中加入正硅酸四乙酯溶液，調(diào)節(jié)pH為7.5-7.8，攪拌，水浴升溫至75-80℃，反應(yīng)3-4h，磁場(chǎng)分離、洗凈，得到二氧化硅磁性微球；

步驟二、將步驟一所得二氧化硅磁性微球超聲分散在乙醇-水體系中，得到懸浮液，向懸浮液中加入3-氨丙基三乙氧基硅烷，水浴加熱至55-65℃，反應(yīng)12-15h，離心取上清，將沉淀分散在N，N-二甲基酰胺溶劑中，加入丁二酸酐，水浴加熱至55-65℃，反應(yīng)12-15h，采用磁場(chǎng)分離、洗凈，得到羧基微球；

步驟三、將步驟一所得二氧化硅磁性微球與步驟二所得羧基微球以質(zhì)量比為（2-3）：（1-4）的比例進(jìn)行混合，得到混合微球；

步驟四、將步驟三所得混合微球懸浮后先在弱磁場(chǎng)中沉降15-20min，去除磁吸附較強(qiáng)的磁珠；重新懸浮后在強(qiáng)磁場(chǎng)中沉降10-15min，去除掉磁吸附較弱的磁珠，得到納米磁珠。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種病毒核酸提取試劑盒，其特征在于：所述納米氧化鐵磁珠分散液的制備過程如下：稱取經(jīng)清洗、干燥和消毒的納米氧化鐵磁珠300-400g，加入到2-3L無水乙醇中，超聲波攪拌0.5h；加入500-600ml濃度為10-50g/L的分散劑，攪拌均勻后，再加入質(zhì)量濃度為25%氨水至體系pH值為10，得納米氧化鐵磁珠分散液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種病毒核酸提取試劑盒，其特征在于：所述分散劑為聚乙二醇或聚乙烯吡咯烷酮。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種病毒核酸提取試劑盒，其特征在于：所述步驟一具體為：以50-200mL/h的滴加速度向納米氧化鐵磁珠分散液中滴加3-4mol/L的正硅酸四乙酯溶液1.0-1.2L，調(diào)節(jié)pH為7.5-7.8，300-800rpm攪拌，水浴升溫至75-80℃，反應(yīng)2-10h，得到二氧化硅磁性微球。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種病毒核酸提取試劑盒，其特征在于：所述步驟二中，所述3-氨丙基三乙氧基硅烷的加入量為所述懸浮液體積的10-15%；所述丁二酸酐與所述二氧化硅磁性微球的摩爾比為（2-3）：1。