[發明專利]siRNA的制備方法

在審

• 申請號: 202011508174.0
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN112626152A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 鄧利;譚景云;香鳳;蘭文升
• 申請（專利權）人: 深圳大學;深圳市檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12P19/34
• 分類號: C12P19/34;C12N15/10
• 代理公司: 深圳中一聯合知識產權代理有限公司 44414
• 代理人: 方良

1.一種siRNA的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

體外轉錄獲得目的基因的dsRNA；

用RNaseⅢ對所述目的基因的dsRNA進行消化處理，得到消化產物；

將所述消化產物凝膠電泳后，切割核酸片段＜30bp的膠塊；

將所述膠塊研磨凍融后，獲得siRNA。

2.如權利要求1所述的siRNA的制備方法，其特征在于，所述消化處理中，RNaseⅢ濃度為0.5-1.5U/μl。

3.如權利要求1所述的siRNA的制備方法，其特征在于，所述凝膠電泳是濃度為3％的瓊脂糖凝膠電泳。

4.如權利要求1所述的siRNA的制備方法，其特征在于，所述研磨凍融的步驟包括：將所述膠塊切碎后，依次冰凍和解凍融化，然后加水研磨。

5.如權利要求4所述的siRNA的制備方法，其特征在于，所述冰凍的溫度為-80℃～0℃；和/或，

所述解凍融化的溫度為20℃-27℃。

6.如權利要求4所述的siRNA的制備方法，其特征在于，所述研磨凍融的步驟重復2-4次。

7.如權利要求4所述的siRNA的制備方法，其特征在于，所述加水研磨后，還包括離心取上清。

8.如權利要求1所述的siRNA的制備方法，其特征在于，所述體外轉錄獲得目的基因的dsRNA的步驟包括：將總RNA反轉錄得到cDNA，用含有T7啟動子的引物擴增所述cDNA，然后進行體外轉錄，并用核酸酶消化。

9.如權利要求1-8任一項所述的siRNA的制備方法，其特征在于，所述目的基因為Unigene12835，得到的所述siRNA為Unigene12835 siRNA；或者，

所述目的基因為Unigene13423，得到的所述siRNA為Unigene13423siRNA；或者，

所述目的基因為Unigene19308，得到的所述siRNA為Unigene19308siRNA；或者，

所述目的基因為Unigene7122，得到的所述siRNA為Unigene7122 siRNA；或者，

所述目的基因為CL1989.Contig1，得到的所述siRNA為CL1989.Contig1siRNA；或者，

所述目的基因為CL3290.Contig2，得到的所述siRNA為CL3290.Contig2siRNA；或者，

所述目的基因為CL3871.Contig1，得到的所述siRNA為CL3871.Contig1siRNA；或者，

所述目的基因為CL51.Contig3，得到的所述siRNA為CL51.Contig3 siRNA。

10.如權利要求1-8任一項所述的siRNA的制備方法，其特征在于，所述獲得siRNA之后，還包括配制成濃度為0.1nmol/L-0.5nmol/L的所述siRNA用于轉染。