[發明專利]一種間充質干細胞的培養方法

有效

• 申請號: 202011507641.8
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN112522191B
• 公開（公告）日: 2023-05-12
• 發明（設計）人: 李天晴;馮春
• 申請（專利權）人: 云南中科靈長類生物醫學重點實驗室
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 張璐

1.一種間充質干細胞的培養方法，其特征在于，使用無血清培養基對間充質干細胞進行培養；

每1L培養基包含以下組分：

IMDM?17.662g、L-丙胺酰-谷氨酰胺2mM、化學脂質0.1-1v/v％、膽固醇5-30mg、胰島素8-25mg、轉鐵蛋白10-30mg、重組人白蛋白1-5g、氫化可的松0.1-2mg、地塞米松4-20μg、孕酮1-10μg、腐胺5-15mg、抗壞血酸25-200mg、β-巰基乙醇50-100μM、大豆卵磷脂2-20mg、七水硫酸鋅1.25-2.5mg、硫辛酸0.1-0.5mg、N-Acetyl-L-Cysteine?0.2-2mM、還原型谷胱甘肽1-5mg、牛磺酸2-10mg、Y-27632?2-10μM、乙醇胺1-5mg、b-FGF?5-40μg、EGF?5-50μg、PDGF-BB2-20μg、IGF-110-40μg、TGF-β3?1-5μg、HGF?2-10μg、CTGF?1-5μg和VEGF?5-20μg；

所述化學脂質包括如下組分：

花生四烯酸，含量為1.8-2.2mg/L，膽固醇，含量為200-240mg/L，維生素E(生育酚)，含量為60-80mg/L，亞油酸，含量為8-12mg/L，亞麻酸，含量為8-12mg/L，肉豆蔻酸，含量為8-12mg/L，油酸，含量為8-12mg/L，棕櫚酸，含量為8-12mg/L，棕櫚油酸，含量為8-12mg/L，Pluronic?F-68，含量為80000-100000mg/L，硬脂酸，含量為8-12mg/L；

所述白蛋白是由植物作為表達宿主得到的重組人白蛋白；

培養方式為3D培養，且當間充質干細胞在微載體上的覆蓋率達到75-85％后，用低營養培養基對間充質干細胞進行培養；

所述低營養培養基由所述無血清培養基與IMDM培養基按體積比1：2～4稀釋得到。

2.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，所述植物為水稻。

3.根據權利要求1所述的培養方法，其特征在于，每1L培養基包含以下組分：

IMDM?17.662g、L-丙胺酰-谷氨酰胺2mM、化學脂質0.6v/v％、膽固醇15mg、胰島素12.5mg、轉鐵蛋白25mg、重組人白蛋白2g、氫化可的松500μg、地塞米松4μg、孕酮5.66μg、腐胺9mg、抗壞血酸100mg、β-巰基乙醇75μM、大豆卵磷脂10mg、七水硫酸鋅2.5mg、硫辛酸0.2mg、N-Acetyl-L-Cysteine?1mM、還原型谷胱甘肽2mg、牛磺酸5mg、Y-27632?5μM、乙醇胺2mg、b-FGF?20μg、EGF?20μg、PDGF-BB?10μg、IGF-1?15μg、TGF-β3?2μg、HGF?10μg、CTGF?2μg和VEGF?15μg。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的培養方法，其特征在于，所述微載體為實心微載體和/或多孔微載體。

5.根據權利要求4所述的培養方法，其特征在于，所述微載體為基于細胞外基質制成的多孔微載體。

6.根據權利要求5所述的培養方法，其特征在于，當所述微載體為基于細胞外基質制成的多孔微載體時，在間充質干細胞培養至第8-12天后，用低營養培養基對間充質干細胞進行培養。

7.一種間充質干細胞的分泌物的獲得方法，其特征在于，使用權利要求1-6中任一項所述的培養方法對間充質干細胞進行培養，收集間充質干細胞的分泌物。

8.根據權利要求7所述的間充質干細胞的分泌物的獲得方法，其特征在于，所述分泌物包括細胞因子、外泌體、分泌蛋白中的一種或幾種。