[發明專利]二維測流免疫層析試紙條及其制備方法

在審

• 申請號: 202011505897.5
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN112630434A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 薛佳瑩;曹滌非;黃國慶;王雷;吳瓊;李瑤;孫堯;孫鑫
• 申請（專利權）人: 黑龍江省科學院高技術研究院
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所 23109
• 代理人: 岳泉清

二維測流免疫層析試紙條及其制備方法，本發明涉及一種試紙條及其制備方法，它為了解決酶聯免疫方法檢測CA153，CA125耗時長，操作繁瑣的問題。本發明二維測流免疫層析試紙條是沿著軸向在底板上依次組裝吸水墊A、第一NC膜、金標結合墊A、樣品墊、金標結合墊B、第二NC膜和吸水墊B，檢測線A上涂有CA125多抗抗體，質控線A上涂有IgG，在檢測線B上涂有CA153多抗抗體，質控線B上涂有IgG，金標結合墊A上涂有標記CA125單抗抗體的膠體金溶液，金標結合墊B上涂有標記CA153單抗抗體的膠體金溶液。本發明開發了腫瘤標志物CA153和CA125免疫層析檢測試紙，該試紙具有快速、準確、易操作的特點。

技術領域

本發明屬于醫療檢測領域，具體涉及一種CA153，CA125二維測流免疫層析試紙條及其制備方法。

背景技術

膠體金測流免疫層析技術是以膠體金作為標記探針，基于抗原抗體特異性結合反應來檢測目標物質的檢測方法。其結構主要包括樣品墊、結合墊、硝酸纖維素(NC膜)、檢測線、質控線、吸水墊和底板。通過毛細管作用力的移動速度差異，在NC膜上實現分離，呈肉眼可見的紅色條帶。自1980年首次研制出檢測人絨毛膜促性腺激素的LFCA試紙用以診斷早孕。LFCA被廣泛的運用于檢測各種分子，包括腫瘤標志物、微生物、霉菌毒素、重金屬和農藥等。

CA125是一種卵巢癌患者病情進展監測的血清腫瘤標志物，其由卵巢癌腫瘤細胞分泌。其表達水平的變化與上皮性卵巢癌的疾病狀態密切相關。CA153是乳腺癌重要的標志物之一，它與乳腺癌的診斷和預后有重要的關系。腫瘤標志物需要長期跟蹤檢測，因此準確、快速、便捷的操作是目前臨床上亟待解決的問題。

發明內容

本發明的目的是為了解決酶聯免疫方法檢測CA153，CA125耗時長，操作繁瑣的問題，而提供一種快速，簡便的二維測流免疫層析試紙條及其制備方法。

本發明二維測流免疫層析試紙條是沿著軸向在底板上依次組裝吸水墊A、第一NC膜、金標結合墊A、樣品墊、金標結合墊B、第二NC膜和吸水墊B，在第一NC膜的檢測線A上涂有CA125多抗抗體，第一NC膜的質控線A上涂有羊抗鼠IgG，在第二NC膜的檢測線B上涂有CA153多抗抗體，第二NC膜的質控線B上涂有羊抗鼠IgG，金標結合墊A上涂有標記CA125單抗抗體的膠體金溶液，金標結合墊B上涂有標記CA153單抗抗體的膠體金溶液。

本發明二維測流免疫層析試紙條的制備方法按照以下步驟實現：

一、向圓底燒瓶中加入氯金酸溶液，回流加熱至沸騰，攪拌情況下加入檸檬酸三鈉溶液反應至反應液變成變紅，繼續加熱10～15min，自然冷卻至室溫，得到膠體金溶液；

二、調節膠體金溶液的pH＝8.5～9.5，加入到離心管中，然后加入CA125單抗抗體，混合均勻反應10～15min，加入BSA水溶液，漩渦震蕩混勻，離心處理后收集沉淀物，沉淀物用硼酸鹽緩沖液重懸至原體積，再次離心處理，沉淀物用稀釋液稀釋至原體積的1/5，得到標記CA125單抗抗體的免疫金；

調節膠體金溶液的pH＝8.5～9.5，加入到離心管中，然后加入CA153單抗抗體，混合均勻反應10～15min，加入BSA水溶液，漩渦震蕩混勻，離心處理后收集沉淀物，沉淀物用硼酸鹽緩沖液重懸至原體積，再次離心處理，沉淀物用稀釋液稀釋至原體積的1/5，得到標記CA153單抗的免疫金；

三、將標記CA125單抗抗體的免疫金噴涂于結合墊A上，凍干處理，得到金標結合墊A；

將標記CA153單抗的免疫金噴涂于結合墊B上，凍干處理，得到金標結合墊B；

四、將CA125多抗抗體涂在第一NC膜的檢測線A上，將羊抗鼠IgG涂于第一NC膜的質控線A上，干燥后得到第一NC膜；

將CA153多抗抗體涂在第二NC膜的檢測線B上，將羊抗鼠IgG涂于第二NC膜的質控線B上，干燥后得到第二NC膜；