[發明專利]一種Fmoc-賴氨酸高效液相色譜測定方法

有效

• 申請號: 202011504705.9
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN112526051B
• 公開（公告）日: 2022-08-09
• 發明（設計）人: 徐紅巖;夏偉冬;馬敬祥
• 申請（專利權）人: 上海吉奉生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 上海浦東良風專利代理有限責任公司 31113
• 代理人: 張勁風

1.一種Fmoc-賴氨酸高效液相色譜測定方法；其特征是；包括以下步驟：

步驟一，準備測量的試劑，測量的試劑包括乙腈-色譜純，乙醇、石油醚，超純水；

步驟二，樣品的前處理，反應液加飽和的氯化鈉水溶液溶解，靜止分層，水相再用乙酸乙酯萃取二次，有機相再用鹽水萃取二次，得到有機相中加入硅酸吸附，然后過濾、濃縮；濃縮樣品再次用乙酸乙酯溶解，冷卻析出固體樣品；

步驟三、樣品溶液的配制，稱取試樣置于棕色容量瓶中，加入乙腈，室溫條件下采用超聲波溶解，用乙腈定容，最后試樣用聚丙烯有機濾膜過濾后進行HPLC分析，當樣品中Fmoc-賴氨酸濃度過高/低時，重新配制標準曲線，使目標化合物落在新的標準曲線的線性范圍內再進行儀器分析計算；

步驟四，進行高效液相色譜測定;色譜測定的的過程為：色譜條件為樣品室溫度為25℃，自動進樣器進樣體積為10 μL，色譜柱為：安捷倫氨基色譜柱 C18，色譜柱的尺寸為4.6mm ×250mm, 5.0μm，柱溫：30 ℃，流速：1.0 mL/min，流動相為質量百分濃度為0.1%TFA水溶液（A）和質量百分濃度為100%乙腈（B）采用梯度洗脫程序，0～2min，V(B)為50%；2～12min，V(B)從50%到95%，12～12.1 min，V(B)從90% 到50% 的初始比例，12.1～15 min，V(B)從50% 平衡系統；通過對流動相酸度值的控制，不使Fmoc-賴氨酸在色譜柱中分解；即保留時間為7.283 min的色譜峰采集到了Fmoc-賴氨酸的主成份。

2.根據權利要求1所述的一種Fmoc-賴氨酸高效液相色譜測定方法，其特征是：所述的液相色譜測定時采用安捷倫 1260 液相色譜儀，該色譜儀采用DAD為檢測器。