[發(fā)明專利]基于隱球酵母Y3胞內(nèi)酶降解赭曲霉毒素A的用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011504094.8
• 申請(qǐng)日: 2020-12-18
• 公開（公告）號(hào): CN112641032B
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張紅印;魏美林;張曉云;楊其亞;趙利娜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/16
• 分類號(hào): C12N1/16;A23L5/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明屬于生物防治技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種基于隱球酵母Y3胞內(nèi)酶降解赭曲霉毒素A的用途；步驟為：首先將隱球酵母Y3接入NYDB培養(yǎng)基中，培養(yǎng)活化后，取菌液涂布于NYDA培養(yǎng)基；然后，挑選單菌落接種到PM培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后經(jīng)離心得到菌體，無菌蒸餾水清洗后，稀釋成1×10⁸cells/mL的菌懸液，接種于PM培養(yǎng)基中培養(yǎng)后，離心收集菌體，加入液氮、研磨，得到粉末狀的菌體；再加入Tris?HCl緩沖液重懸，震蕩后經(jīng)冰浴處理、離心，收集上清液，通過有機(jī)針孔濾膜過濾除菌，得到胞內(nèi)酶溶液；在胞內(nèi)酶溶液中加入赭曲霉毒素A，在避光環(huán)境下，震蕩培養(yǎng)，即可實(shí)現(xiàn)降解赭曲霉毒素A的用途；本發(fā)明安全環(huán)保，可高效快速降解赭曲霉毒素A。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物降解毒素的方法，具體涉及一種基于隱球酵母Y3胞內(nèi)酶降解赭曲霉毒素A的用途。

背景技術(shù)

真菌毒素是由真菌類微生物產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，到目前為止，人們發(fā)現(xiàn)了至少300種真菌毒素。世界上毒性最強(qiáng)的五類真菌毒素中，赭曲霉毒素A排列第二，其最明顯的毒性作用是腎毒性，其次還有肝臟、免疫毒性等，被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)列為2B類人類致癌物。

除了嚴(yán)重的毒性作用，赭曲霉毒素A在食品和飼料中污染嚴(yán)重。自然界中產(chǎn)生赭曲霉毒素A的主要霉菌有兩類，第一類是Aspergillus ochraceus和Penicilliumverrucosum，這兩類真菌的寄主主要是農(nóng)作物，包括玉米、小麥、水稻等，該類霉菌在熱帶和亞熱帶地區(qū)發(fā)病較為嚴(yán)重；還有一種霉菌是Aspergillus carbonarins，其寄主主要是葡萄，該類霉菌在寒冷的地區(qū)發(fā)病比較嚴(yán)重。到目前為止，赭曲霉毒素A已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)存在于各類食品中，如醬油，葡萄及其制品，以及肉類產(chǎn)品和咖啡中。赭曲霉毒素A在人體中的存在也是令人擔(dān)憂的問題，2019年基于葡萄牙地區(qū)的研究發(fā)現(xiàn)，超過90％的兒童的尿液中被檢測(cè)到該毒素。

由于赭曲霉毒素A極強(qiáng)的毒性和廣泛的污染，在食品和飼料中控制其含量是保障食品安全的重要舉措。赭曲霉毒素A是由-羧基-5-氯-8-羥基-3，4-二氫-3-R-甲基異香豆素(赭曲霉毒素α)和L-β-苯丙氨酸通過酰胺鍵連在一起的聚酮類化合物，耐酸性和高溫環(huán)境，在自然環(huán)境中較難降解。一般通過斷裂酰胺鍵，生成赭曲霉毒素α和L-β-苯丙氨酸達(dá)到解毒的效果。

目前對(duì)赭曲霉毒素A的控制方法包括物理方式、化學(xué)方式、生物方式。物理方式降解赭曲霉毒素A包括吸附和加熱降解；吸附是常見的脫除毒素的方法，但是不能徹底降解毒素，使其殘留在環(huán)境中，造成二次污染；加熱也是脫除赭曲霉毒素A的有效方式，但是容易造成產(chǎn)品品質(zhì)降低的問題。化學(xué)方式降解赭曲霉毒素A也是常見的脫毒方式，而且已經(jīng)研究出的降解赭曲霉毒素A的化學(xué)方式多樣化，如利用過氧化物酶(POD)、蛋白質(zhì)和糖類降解赭曲霉毒素A，但是操作復(fù)雜，成本較高。

近年來，采用微生物及其產(chǎn)生的酶降解毒素成為研究的熱點(diǎn)，雖然已有較多的酵母菌、乳酸菌和霉菌被發(fā)現(xiàn)具有降解赭曲霉毒素A的功效，但是發(fā)掘出來的降解酶的種類有限、而且降解效果不佳，因此，挖掘新的高效降解酶是非常必要的。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的缺陷與不足，本發(fā)明提供一株分離篩選自土壤的隱球酵母(Cryptococcus podzolicus)Y3，基于隱球酵母Y3的胞內(nèi)酶降解赭曲霉毒素A，其具有高安全性和極高的降解效果。

本發(fā)明所提供的降解赭曲霉毒素A的隱球酵母系從鎮(zhèn)江市句容市果園收集的土壤中篩選分離到的，在NYDA固體培養(yǎng)基平板上28℃培養(yǎng)3d，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察；已經(jīng)對(duì)該菌株的5.8S rDNA-ITS區(qū)序列進(jìn)行分析并進(jìn)行了分子生物學(xué)鑒定。同時(shí)，本發(fā)明所提供的酵母菌株，現(xiàn)保藏于中國(guó)武漢大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏編號(hào)為：CCTCC NO：M2017505，建議的分類命名為隱球酵母(Cryptococcus podzolicus)Y3。此外，本發(fā)明所利用的菌株申請(qǐng)人已經(jīng)申請(qǐng)中國(guó)發(fā)明專利，CN201711183834.0，發(fā)明名稱為：一株降解桔霉素的酵母菌及應(yīng)用。

為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：