[發明專利]基于隱球酵母Y3胞內酶降解赭曲霉毒素A的用途

有效

• 申請號: 202011504094.8
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN112641032B
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發明（設計）人: 張紅印;魏美林;張曉云;楊其亞;趙利娜
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;A23L5/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明屬于生物防治技術領域，涉及一種基于隱球酵母Y3胞內酶降解赭曲霉毒素A的用途；步驟為：首先將隱球酵母Y3接入NYDB培養基中，培養活化后，取菌液涂布于NYDA培養基；然后，挑選單菌落接種到PM培養基中，培養后經離心得到菌體，無菌蒸餾水清洗后，稀釋成1×10⁸cells/mL的菌懸液，接種于PM培養基中培養后，離心收集菌體，加入液氮、研磨，得到粉末狀的菌體；再加入Tris?HCl緩沖液重懸，震蕩后經冰浴處理、離心，收集上清液，通過有機針孔濾膜過濾除菌，得到胞內酶溶液；在胞內酶溶液中加入赭曲霉毒素A，在避光環境下，震蕩培養，即可實現降解赭曲霉毒素A的用途；本發明安全環保，可高效快速降解赭曲霉毒素A。

技術領域

本發明屬于生物降解毒素的方法，具體涉及一種基于隱球酵母Y3胞內酶降解赭曲霉毒素A的用途。

背景技術

真菌毒素是由真菌類微生物產生的次級代謝產物，到目前為止，人們發現了至少300種真菌毒素。世界上毒性最強的五類真菌毒素中，赭曲霉毒素A排列第二，其最明顯的毒性作用是腎毒性，其次還有肝臟、免疫毒性等，被國際癌癥研究機構列為2B類人類致癌物。

除了嚴重的毒性作用，赭曲霉毒素A在食品和飼料中污染嚴重。自然界中產生赭曲霉毒素A的主要霉菌有兩類，第一類是Aspergillus ochraceus和Penicilliumverrucosum，這兩類真菌的寄主主要是農作物，包括玉米、小麥、水稻等，該類霉菌在熱帶和亞熱帶地區發病較為嚴重；還有一種霉菌是Aspergillus carbonarins，其寄主主要是葡萄，該類霉菌在寒冷的地區發病比較嚴重。到目前為止，赭曲霉毒素A已經被發現存在于各類食品中，如醬油，葡萄及其制品，以及肉類產品和咖啡中。赭曲霉毒素A在人體中的存在也是令人擔憂的問題，2019年基于葡萄牙地區的研究發現，超過90％的兒童的尿液中被檢測到該毒素。

由于赭曲霉毒素A極強的毒性和廣泛的污染，在食品和飼料中控制其含量是保障食品安全的重要舉措。赭曲霉毒素A是由-羧基-5-氯-8-羥基-3，4-二氫-3-R-甲基異香豆素(赭曲霉毒素α)和L-β-苯丙氨酸通過酰胺鍵連在一起的聚酮類化合物，耐酸性和高溫環境，在自然環境中較難降解。一般通過斷裂酰胺鍵，生成赭曲霉毒素α和L-β-苯丙氨酸達到解毒的效果。

目前對赭曲霉毒素A的控制方法包括物理方式、化學方式、生物方式。物理方式降解赭曲霉毒素A包括吸附和加熱降解；吸附是常見的脫除毒素的方法，但是不能徹底降解毒素，使其殘留在環境中，造成二次污染；加熱也是脫除赭曲霉毒素A的有效方式，但是容易造成產品品質降低的問題。化學方式降解赭曲霉毒素A也是常見的脫毒方式，而且已經研究出的降解赭曲霉毒素A的化學方式多樣化，如利用過氧化物酶(POD)、蛋白質和糖類降解赭曲霉毒素A，但是操作復雜，成本較高。

近年來，采用微生物及其產生的酶降解毒素成為研究的熱點，雖然已有較多的酵母菌、乳酸菌和霉菌被發現具有降解赭曲霉毒素A的功效，但是發掘出來的降解酶的種類有限、而且降解效果不佳，因此，挖掘新的高效降解酶是非常必要的。

發明內容

針對現有技術的缺陷與不足，本發明提供一株分離篩選自土壤的隱球酵母(Cryptococcus podzolicus)Y3，基于隱球酵母Y3的胞內酶降解赭曲霉毒素A，其具有高安全性和極高的降解效果。

本發明所提供的降解赭曲霉毒素A的隱球酵母系從鎮江市句容市果園收集的土壤中篩選分離到的，在NYDA固體培養基平板上28℃培養3d，進行形態學觀察；已經對該菌株的5.8S rDNA-ITS區序列進行分析并進行了分子生物學鑒定。同時，本發明所提供的酵母菌株，現保藏于中國武漢大學的中國典型培養物保藏中心(CCTCC)，保藏編號為：CCTCC NO：M2017505，建議的分類命名為隱球酵母(Cryptococcus podzolicus)Y3。此外，本發明所利用的菌株申請人已經申請中國發明專利，CN201711183834.0，發明名稱為：一株降解桔霉素的酵母菌及應用。

為了實現以上目的，本發明采用的技術方案如下：