[發明專利]基于隱球酵母Y3胞內酶降解赭曲霉毒素A的用途

有效

• 申請號: 202011504094.8
• 申請日: 2020-12-18
• 公開（公告）號: CN112641032B
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發明（設計）人: 張紅印;魏美林;張曉云;楊其亞;趙利娜
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;A23L5/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.基于隱球酵母Y3胞內酶降解赭曲霉毒素A的用途，其特征在于，具體步驟如下：

(1)配制菌懸液：將隱球酵母Y3接入NYDB培養基中，在28～30℃、180rpm震蕩條件下，培養20～24h，進行活化，得到活化后的菌液；然后取活化后的菌液涂布于NYDA固體培養基，培養溫度28℃～30℃，時間48-60h；然后，挑選NYDA固體培養基生長的隱球酵母Y3單菌落接種到PM培養基中進行培養，培養后經離心得到菌體，并用無菌蒸餾水清洗數次，清洗后再次離心，收集菌體用無菌水稀釋成菌懸液；

(2)取步驟(1)制備的菌懸液，接種于PM培養基中，在28～30℃、180rpm震蕩條件下，培養20～24h，離心收集酵母菌體，無菌蒸餾水清洗后再次離心收集酵母菌體，然后加入液氮速凍菌體，進行研磨，得到粉末狀的菌體；然后將粉末狀的菌體加入Tris-HCl緩沖液重懸，震蕩后進行冰浴處理，處理后離心，收集上清液，即為胞內粗酶液；

(3)再將步驟(2)中得到的胞內粗酶液通過針孔濾膜過濾除菌，得到胞內酶溶液；在胞內酶溶液中加入赭曲霉毒素A，在避光環境下，震蕩培養，即可實現降解赭曲霉毒素A的用途。

2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，步驟(1)中所述離心的轉速為7000r/min，時間為10min。

3.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，步驟(1)中所述的NYDA培養基成分如下：以1000mL計，牛肉膏8g，酵母浸出物5g，葡萄糖10g，瓊脂20g，余量為蒸餾水，115℃濕熱滅菌15min。

4.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的NYDB培養基成分如下：以1000mL計，酵母膏5g，葡萄糖10g，牛肉浸膏8g，余量為蒸餾水，pH自然，115℃濕熱滅菌15min。

5.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，步驟(1)中所述PM培養基成分如下：麥芽糖2g，蔗糖10g，酵母浸膏5g，蛋白胨5g，一級蒸餾水1000mL，115℃濕熱滅菌15min。

6.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，步驟(1)中所述單菌落接種到PM培養基中進行培養的溫度為28℃～30℃，時間為48h。

7.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，步驟(1)中所述用無菌蒸餾水洗滌數次具體為2～3次；所述菌懸液的濃度為1×10⁸cells/mL。

8.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，步驟(2)中所述菌懸液接種于PM培養基中的接種量為1％～2％。

9.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，步驟(2)中所述震蕩的時間為1～2min；所述冰浴處理的時間為30～35min；所述離心的條件為：4℃，15～20min、11000×g。

10.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，步驟(3)中所述針孔濾膜的孔徑為0.22μm，有機相；所述震蕩培養的條件為：28℃，180rpm，時間0～3h。