[發明專利]檢測人生長分化因子-15的熒光免疫層析試紙條及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011502960.X
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112698042A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 李君麗;朱海燕;周金池;王蘭珍
• 申請（專利權）人: 北京賽諾浦生物技術有限公司;柳璐
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/533;G01N33/52
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍

1.一種檢測人生長分化因子-15的熒光免疫層析試紙條，其特征在于，所述的試紙條包括底板以及依次設在所述底板上的加樣墊、結合墊、檢測墊以及吸水墊，加樣墊與結合墊搭接，檢測墊與結合墊搭接，吸水墊與檢測墊搭接，檢測墊上設置有檢測線和質檢線，檢測線位于加樣墊一端，質檢線位于遠離加樣墊一端，所述結合墊上包載有標記鼠抗人生長分化因子-15單克隆抗體的免疫熒光微球以及標記兔IgG的免疫熒光微球，所述的檢測線上包被有鼠抗人生長分化因子-15單克隆捕獲抗體，所述的質檢線上包被有羊抗兔IgG多抗，標記免疫熒光微球所使用的鼠抗人生長分化因子-15單克隆抗體與檢測線上包被的鼠抗人生長分化因子-15單克隆捕獲抗體為具有不同抗原識別表位的單克隆抗體，且與生長分化因子-15能夠形成抗體-抗原-抗體形式的復合物。

2.如權利要求1所述的熒光免疫層析試紙條，其特征在于，所述的標記免疫熒光微球所使用的鼠抗人生長分化因子-15單克隆抗體為抗人生長分化因子-15單克隆抗體[23G10.F8]，貨號ab105732，購自ABCAM公司；檢測線上包被的鼠抗人生長分化因子-15單克隆捕獲抗體為抗人生長分化因子-15單克隆抗體[7C12.B3.F2]，貨號ab106112，購自ABCAM公司。

3.如權利要求1所述的熒光免疫層析試紙條，其特征在于，所述的免疫熒光微球為表面修飾有羧基的200nm熒光微球。

4.一種制備權利要求1-3任一項所述的熒光免疫層析試紙條的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)結合墊預處理

聚酯膜放入潔凈的有孔托盤中，先用自來水流水處理1分鐘，再用純化水反復清洗5次，然后用預處理液潤洗3次后，浸泡5～10分鐘，取出處理好的聚酯膜、烘箱在35～40攝氏度烘干備用；

所述的預處理液中含有TRIS 1-10g/L、氯化鈉5-10g/L、表面活性劑0.5～6g/L，pH值8.0±0.1；優選的，所述的預處理液中含有TRIS 6.05g/L、氯化鈉9g/L、表面活性劑1.5g/L，pH值8.0±0.1；

(2)標記GDF-15單克隆抗體以及兔IgG的熒光微球的制備

熒光微球經過活化，洗滌后，分別加入鼠抗人生長分化因子15單克隆抗體以及兔IgG進行偶聯和封閉，然后洗滌除去未結合的抗體，加入保存緩沖液液保存；

(3)結合墊制備

取標記好鼠抗人GDF-15抗體的熒光微球和標記好兔IgG的熒光微球加入到結合緩沖液中噴涂于聚酯膜上制作為結合墊，烘箱烘干，保存待用；所述的結合緩沖液中含有TRIS0.1-0g/dL、BSA 2-8g/dL、蔗糖10-20g/dL、D海藻糖1-10g/dL，pH值8.0±0.1，優選的，所述的結合緩沖液中含有TRIS 0.605g/dL、BSA 5g/dL、蔗糖15g/dL、D海藻糖5g/dL,pH值8.0±0.1；

(4)人生長分化因子15抗體包被及檢測墊的制備

將鼠抗人生長分化因子-15單克隆捕獲抗體配制成檢測線工作液，包被抗體濃度在0.5mg/ml-1.0mg/ml，將羊抗兔IgG配制成質檢線工作液，包被抗體濃度在0.8mg/ml-1.2mg/ml，取檢測線工作液和質檢線工作液分別用劃膜儀點在硝酸纖維素膜上得到檢測線和質檢線，干燥冷藏備用；

(5)組裝

將檢測墊、結合墊、加樣墊、吸水墊，按固定順序貼在底板上，組裝成試紙大板，在干燥條件下儲存備用；

(5)切割

將組裝好的試紙大板用切條機切割成寬度4mm(±0.05mm)的試紙條，在干燥條件下儲存備用。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的表面活性劑為單十二烷基九乙二醇醚、聚乙烯吡咯烷酮K30、聚氧乙烯基聯苯乙烯化苯基醚、月桂醇聚氧乙烯醚、3-[3-(膽酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸內鹽、3-[(3-膽固醇氨丙基)二甲基氨基]-2-羥基-1-丙磺酸、辛基酚聚氧乙烯醚、十二烷基-beta-D-麥芽糖苷、N-壬酰基-N-甲基葡萄糖胺或聚乙二醇辛基苯基醚，優選的，所述的表面活性劑為單十二烷基九乙二醇醚。