[發明專利]檢測人生長分化因子-15的熒光免疫層析試紙條及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011502960.X
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112698042A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 李君麗;朱海燕;周金池;王蘭珍
• 申請（專利權）人: 北京賽諾浦生物技術有限公司;柳璐
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/533;G01N33/52
• 代理公司: 北京思元知識產權代理事務所(普通合伙) 11598
• 代理人: 余光軍

本發明公開了一種檢測人生長分化因子?15的熒光免疫層析試紙條及其制備方法和應用，所述的試紙條包括底板以及依次設在所述底板上的加樣墊、結合墊、檢測墊以及吸水墊，所述結合墊上包載有標記鼠抗人生長分化因子?15單克隆抗體的免疫熒光微球以及標記兔IgG的免疫熒光微球，所述的檢測線上包被有鼠抗人生長分化因子?15單克隆捕獲抗體，所述的質檢線上包被有羊抗兔IgG多抗。本發明通過對制備方法進行改進，改善了試紙條在采用熒光定量法檢測人生長分化因子?15中的靈敏度和重復性，為人生長分化因子15的檢測提供了新的技術手段。

技術領域

本發明涉及一種熒光免疫層析試紙條及其制備方法和應用，特別涉及一種用于檢測人生長分化因子-15的熒光免疫層析試紙條及其制備方法和應用。本發明屬于醫藥技術領域。

背景技術

生長分化因子-15(growth differentiation factor-15，GDF15)屬生長分化因子(GDFs)家族，是轉化生長因子-β(transforming growth factor B，TGF—B)超家族成員之一。研究顯示，人GDF15基因序列位于19p13.1—13.2，包含924個堿基對，由2個外顯子和1個內含子構成，并被其內含子分隔開來。GDF15的基因首先轉錄翻譯成308個氨基酸殘基的多肽，最終形成包含224個氨基酸殘基的GDF15成熟蛋白。

一般情況下GDF15僅在胎盤和前列腺中高表達，而在心臟、其他器官、組織中表達量很少，但在在腫瘤、妊娠、神經元損傷及骨骼肌發育異常等多種疾病狀態下增高，并且還參與心血管疾病的演變過程。研究表明血清中GDF15的濃度與多種心血管不良事件密切相關，對心力衰竭、急性心肌梗死、急性冠脈綜合征等疾病的早期預測和預后風險提示有較高的價值，是為數不多的極具潛力的心血管疾病生物標志物。

截止目前，該標志物僅停留在實驗室研究階段，其研究方向主要是急性冠脈綜合征及心力衰竭的病情評估和心梗、腦梗等疾病的預后。所采用的酶聯免疫吸附方法，該方法存在抗體孵育時間長、洗滌次數多等弊端，不適用于臨床一線檢測。

申請號為201610798041.9的發明專利申請公開了一種人生長分化因子-15的檢測試紙組件。該專利申請使用磁微粒偶聯抗人生長分化因子15單克隆抗體制備結合墊，在檢測線上包被抗人生長分化因子15多克隆抗體來捕獲結合了樣本中GDF15的磁微粒，通過檢測線的磁力強度來進行定量。該技術的優點是解決了酶聯免疫檢測時間長的弊端，但其缺陷是市面上基于磁場強度檢測的適用于檢測卡的磁性免疫分析儀較少，因此限制了該產品的臨床推廣。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測生長分化因子-15的熒光免疫層析試紙條及其制備方法，該試紙條可以在熒光免疫分析上使用。

為了達到上述目的，本發明采用了以下技術手段：

本發明的一種檢測人生長分化因子-15的熒光免疫層析試紙條，包括底板以及依次設在所述底板上的加樣墊、結合墊、檢測墊以及吸水墊，加樣墊與結合墊搭接，檢測墊與結合墊搭接，吸水墊與檢測墊搭接，檢測墊上設置有檢測線和質檢線，檢測線位于加樣墊一端，質檢線位于遠離加樣墊一端，所述結合墊上包載有標記鼠抗人生長分化因子-15單克隆抗體的免疫熒光微球以及標記兔IgG的免疫熒光微球，所述的檢測線上包被有鼠抗人生長分化因子-15單克隆捕獲抗體，所述的質檢線上包被有羊抗兔IgG多抗，標記免疫熒光微球所使用的鼠抗人生長分化因子-15單克隆抗體與檢測線上包被的鼠抗人生長分化因子-15單克隆捕獲抗體為具有不同抗原識別表位的單克隆抗體，且與生長分化因子-15能夠形成抗體-抗原-抗體形式的復合物。

其中，優選的，所述的標記免疫熒光微球所使用的鼠抗人生長分化因子-15單克隆抗體為抗人生長分化因子-15單克隆抗體[23G10.F8]，貨號ab105732，購自ABCAM公司；檢測線上包被的鼠抗人生長分化因子-15單克隆捕獲抗體為抗人生長分化因子-15單克隆抗體[7C12.B3.F2]，貨號ab106112，購自ABCAM公司。