[發(fā)明專利]一種高效抗豬流行性腹瀉單克隆抗體制備及工藝

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202011497347.3
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112898417A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發(fā)明（設計）人: 袁延定;賈亞娟;李秋艷;李永勤;李瑞英
• 申請（專利權）人: 河南九天生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;A61K39/42;A61P31/14;A61P1/12
• 代理公司: 鄭州銀河專利代理有限公司 41158
• 代理人: 嚴艷麗

1.一種高效抗豬流行性腹瀉單克隆抗體制備及工藝，其特征在于：所述的高效抗豬流行性腹瀉單克隆抗體制備及工藝包括以下步驟；

S1，配置基液，首先將PLGA-COOH與NH2-PEG-COOH通過酸胺連接生成PLGA-PEG-COOH，然后將促吞噬肽加入PLGA-PEG-COOH連接生成PLGA-PEG-Tf，最后將阿魏酸，氯仿及佐劑一同添加到PLGA-PEG-Tf中，經(jīng)過超聲波均質得到油相基液，并以10℃—25℃恒溫環(huán)境保存；

S2，配置抗原，取豬流行性腹瀉病毒S1單元和滅活的豬流行性腹瀉病毒HN301株，然后對豬流行性腹瀉病毒S1單元和滅活的豬流行性腹瀉病毒HN301株的N、S基因序列進行PT-PCR方法進行擴增培養(yǎng)，得到重組的PcoldI-N和PcoldI-S，然后將PcoldI-N和PcoldI-S轉入到Rosetta感受態(tài)細胞中，經(jīng)IPTG誘導獲得重組蛋白，最后用親和柱對PcoldI-N和PcoldI-S進行純化，并對純化后的PcoldI-N和PcoldI-S進行滅活處理；

S3，混合配置，將S2步驟獲得的滅活PcoldI-N和PcoldI-S混合并進行至少3次亞克隆，且每次亞克隆均得到一株PEDV N蛋白特異細胞株，然后將各PEDV N蛋白特異細胞株添加到S1步驟制備的基液中，然后進行純化即可得到成品抗體。

2.根據(jù)權利1所述的一種高效抗豬流行性腹瀉單克隆抗體制備及工藝，其特征在于：所述的S1步驟中，吞噬肽與PLGA-PEG-COOH通過馬來酰胺反應，其濃度配比1:15—30。

3.根據(jù)權利1所述的一種高效防止仔豬腹瀉的中藥制劑及其制備方法的制備方法，其特征在于：所述的S1步驟阿魏酸濃度為2~15mg/mL、PLGA-PEG-Tf濃度為10~100mg/mL。

4.根據(jù)權利1所述的一種高效防止仔豬腹瀉的中藥制劑及其制備方法的制備方法，其特征在于：所述的S2步驟和S3步驟中純化作業(yè)時，采用減壓蒸發(fā)純化，減壓蒸發(fā)時的作業(yè)壓力為0.01—0.05Mpa。

5.根據(jù)權利1所述的一種高效防止仔豬腹瀉的中藥制劑及其制備方法的制備方法，其特征在于：所述的佐劑為鋁膠佐劑、皂苷、油包水乳劑、水包油乳劑、丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物、RIBI佐劑系統(tǒng)、大腸桿菌不耐熱腸毒素、IMS 1314、胞壁酰二肽或Gel佐劑中的任意一種或幾種共用。