[發(fā)明專利]一種高效抗豬流行性腹瀉單克隆抗體制備及工藝

在審

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• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112898417A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發(fā)明（設計）人: 袁延定;賈亞娟;李秋艷;李永勤;李瑞英
• 申請（專利權）人: 河南九天生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/10
• 分類號: C07K16/10;A61K39/42;A61P31/14;A61P1/12
• 代理公司: 鄭州銀河專利代理有限公司 41158
• 代理人: 嚴艷麗

本發(fā)明提供了一種高效抗豬流行性腹瀉單克隆抗體制備及工藝，包括配置基液，配置抗原及混合配置等三個步驟。本發(fā)明制備工藝簡單，且首次通過馬來酰胺反應制備豬流行性腹瀉抗體，極大的提高生產效率了抗體的有效性和安全性，同時有效的拓展了抗體的適應性和適用范圍，從而有效降低了養(yǎng)殖工作中疫苗接種的的頻率，成本及勞動強度及難度。

技術領域

本發(fā)明涉及一種高效抗豬流行性腹瀉單克隆抗體制備及工藝，屬疫苗制劑生產技術領域。

背景技術

抗腹瀉疫苗是當前養(yǎng)豬業(yè)中降低因腹瀉造成的豬消化疾病及因腹瀉造成死亡的重要方法，但在實際的工作中，當所使用的疫苗往往均采用的傳統(tǒng)生產工藝，從而一方面導致疫苗生產效率低下，且難以有效實現大規(guī)模生產，進而造成當前該類疫苗市場缺口較大，且生產及使用成本均相對較高；另一方面當前疫苗的適應范圍相對較小，往往僅能滿足單一種類或相近類型病毒的免疫，且疫苗的免疫成功率的穩(wěn)定性也相對較差，從而導致在實際養(yǎng)殖工作中需要進行頻繁的疫苗接種，在增加疫苗接種成本的同時，也造成疫苗接種成本、勞動強度及難度隨之增加。

因此針對這一現狀，迫切需要開發(fā)一種全新的一種高效抗豬流行性腹瀉單克隆抗體制備的方法和工藝，以滿足實際使用和養(yǎng)殖工作的需要。

發(fā)明內容

本發(fā)明目的就在于克服上述不足，提供一種豬流行性腹瀉抗體及其制備方法。

為了達到上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：

一種高效抗豬流行性腹瀉單克隆抗體制備及工藝，包括以下步驟；

S1，配置基液，首先將PLGA-COOH與NH2-PEG-COOH通過酸胺縮合反應連接生成PLGA-PEG-COOH，然后將促吞噬肽加入PLGA-PEG-COOH連接生成PLGA-PEG-Tf，最后將阿魏酸，氯仿及佐劑一同添加到PLGA-PEG-Tf中，經過超聲波均質得到油相基液，并以10℃—25℃恒溫環(huán)境保存；

S2，配置抗原，取豬流行性腹瀉病毒S1單元和滅活的豬流行性腹瀉病毒HN301株，然后對豬流行性腹瀉病毒S1單元和滅活的豬流行性腹瀉病毒HN301株的N、S基因序列進行PT-PCR方法進行擴增培養(yǎng)，得到重組的PcoldI-N和PcoldI-S，然后將PcoldI-N和PcoldI-S轉入到Rosetta感受態(tài)細胞中，經IPTG誘導獲得重組蛋白，最后用親和柱對PcoldI-N和PcoldI-S進行純化，并對純化后的PcoldI-N和PcoldI-S進行滅活處理；

S3，混合配置，將S2步驟獲得的滅活PcoldI-N和PcoldI-S混合并進行至少3次亞克隆，且每次亞克隆均得到一株PEDV N蛋白特異細胞株，然后將各PEDV N蛋白特異細胞株添加到S1步驟制備的基液中，然后進行純化即可得到成品抗體。

進一步的，所述的S1步驟中，吞噬肽與PLGA-PEG-COOH通過馬來酰胺反應，其濃度配比1:15—30。

進一步的，所述的S1步驟阿魏酸濃度為2~15mg/mL、PLGA-PEG-Tf濃度為10~100mg/mL。

進一步的，所述的S2步驟和S3步驟中純化作業(yè)時，采用減壓蒸發(fā)純化，減壓蒸發(fā)時的作業(yè)壓力為0.01—0.05Mpa。

進一步的，所述的佐劑為鋁膠佐劑、皂苷、油包水乳劑、水包油乳劑、丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物、RIBI佐劑系統(tǒng)、大腸桿菌不耐熱腸毒素、IMS 1314、胞壁酰二肽或Gel佐劑中的任意一種或幾種共用。

本發(fā)明制備工藝簡單，且首次通過馬來酰胺反應制備豬流行性腹瀉抗體，極大的提高生產效率了抗體的有效性和安全性，同時有效的拓展了抗體的適應性和適用范圍，從而有效降低了養(yǎng)殖工作中疫苗接種的的頻率，成本及勞動強度及難度。

附圖說明