[發明專利]一種犬血白蛋白的制備方法、利用其得到的犬血白蛋白和應用

在審

• 申請號: 202011495794.5
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112521485A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 羅堅;陳西釗;黃永東;馮雪;劉巧榮;馬君
• 申請（專利權）人: 中國科學院過程工程研究所;北京世紀元亨動物防疫技術有限公司;中科森輝微球技術（蘇州）有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/18;C07K1/34;A61K38/38;A61P7/08;A61P7/10
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

本發明提供一種犬血白蛋白的制備方法、利用其得到的犬血白蛋白和應用。所述制備方法包括：將犬血漿離心后取上清液，再依次使用陽離子交換層析和陰離子交換層析純化所述上清液，而后，經過超濾濃縮和緩沖液置換，得到犬血白蛋白溶液。本發明所述制備方法以犬血漿離心分離后的上清液為原料，通過陽離子交換層析和陰離子交換層析去除上清液中的多種大分子及小分子雜質蛋白，提高了所得犬血白蛋白的純度，且該方法中不經過沉淀、深層過濾和溶解等工藝過程，減少了制備過程中白蛋白的損耗，提高了產品的收率。

技術領域

本發明涉及生物制品和血液制品生產技術領域，具體涉及動物血漿白蛋白的制備方法，尤其涉及一種犬血白蛋白的制備方法、利用其得到的犬血白蛋白和應用。

背景技術

隨著寵物犬進入千家萬戶，寵物犬的保健問題引起廣泛的關注。犬血白蛋白的主要生理功能為調節滲透壓和在新陳代謝中充當重要的物質運輸載體，其適應癥非常廣泛，常用作血溶擴充劑代替輸血，可提高血漿膠體滲透壓，增加血容量，用于治療因失血、創傷及燒傷等引起的休克、腦水腫及大腦損傷所致的顱內壓增高，對防治低蛋白血癥以及肝硬化或腎病引起的水腫或腹水有較好的療效。

目前由犬血漿制備犬血白蛋白的方法主要為基于Cohn-Oncley法或Kistler-Nitschmann法為主的低溫乙醇工藝。

例如，CN1648134A中記載了一種制備犬血白蛋白的低溫乙醇工藝，所述工藝步驟包括：血漿的合并與融化、經過四次離心對上清液進行處理去除雜蛋白后得到沉淀的白蛋白、超濾和巴氏滅活后分裝得到犬血白蛋白?，F今多數血液制品生產廠家均按照此方法制備犬血白蛋白，然而，上述方法分離步驟多、分離周期長、工藝復雜且全程要求低溫環境，而制品純度卻不高。以中國藥典規定的方法對國內市售的犬血白蛋白產品進行檢測，純度在90％左右，多聚體含量≥6％。較低的純度會影響制品的穩定性和臨床應用的安全性，導致更多的用藥不良反應。

因此，提供一種制備過程簡單、適用于大規模生產且所得犬血白蛋白純度和收率都較高的犬血白蛋白制備方法，對本領域而言具有重要的意義。

發明內容

鑒于現有技術中存在的問題，本發明提供一種犬血白蛋白的制備方法、利用其得到的犬血白蛋白和應用。所述制備方法過程簡單，減少了沉淀、深層過濾和溶解工藝過程中引起的犬血白蛋白收率損失，且經過兩步層析，提高了所得蛋白制品的純度，極大地提高了應用的安全性。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供一種犬血白蛋白的制備方法，所述制備方法包括：將犬血漿離心后取上清液，再依次使用陽離子交換層析和陰離子交換層析純化所述上清液，而后，經過超濾濃縮和緩沖液置換，得到犬血白蛋白溶液。

本發明提供的制備方法采用犬血漿離心分離后的上清液為原料進行柱層析處理，通過陽離子交換層析和陰離子交換層析去除上清液中的多種大分子及小分子雜質蛋白，提高了所得犬血白蛋白的純度，且該方法中不經過沉淀、深層過濾和溶解等工藝過程，減少了制備過程中白蛋白的損耗，提高了產品的收率；并且，陽離子交換層析采用犬血白蛋白流穿法，大大地提高了血漿原料的處理量，因此該方法也同樣適用于大規模生產。

作為本發明優選的技術方案，所述制備方法包括如下步驟：

(1)將犬血漿離心，收集上清液并調節pH，再使用平衡緩沖液進行稀釋；

(2)將步驟(1)中稀釋后得到的上清液使用陽離子交換層析柱進行層析，收集流穿液；

(3)調節步驟(2)所得流穿液的pH，并使用陰離子交換層析柱進行層析，再用陰離子交換層析洗脫緩沖液進行洗脫，收集洗脫液；

(4)調節步驟(3)所得的洗脫液的pH，并使用超濾膜進行超濾濃縮和緩沖液置換，得到犬血白蛋白溶液。