[發(fā)明專利]一種犬血白蛋白的制備方法、利用其得到的犬血白蛋白和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011495794.5
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號(hào): CN112521485A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅堅(jiān);陳西釗;黃永東;馮雪;劉巧榮;馬君
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院過程工程研究所;北京世紀(jì)元亨動(dòng)物防疫技術(shù)有限公司;中科森輝微球技術(shù)（蘇州）有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/765
• 分類號(hào): C07K14/765;C07K1/18;C07K1/34;A61K38/38;A61P7/08;A61P7/10
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種犬血白蛋白的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：

將犬血漿離心后取上清液，再依次使用陽離子交換層析和陰離子交換層析純化所述上清液，而后，經(jīng)過超濾濃縮和緩沖液置換，得到犬血白蛋白溶液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：

(1)將犬血漿離心，收集上清液并調(diào)節(jié)pH，再使用平衡緩沖液進(jìn)行稀釋；

(2)將步驟(1)中稀釋后得到的上清液使用陽離子交換層析柱進(jìn)行層析，收集流穿液；

(3)調(diào)節(jié)步驟(2)所得流穿液的pH，并使用陰離子交換層析柱進(jìn)行層析，再用陰離子交換層析洗脫緩沖液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液；

(4)調(diào)節(jié)步驟(3)所得的洗脫液的pH，并使用超濾膜進(jìn)行超濾濃縮和緩沖液置換，得到犬血白蛋白溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述離心的溫度為2～6℃；

優(yōu)選地，步驟(1)所述離心的轉(zhuǎn)速為8000～12,000r/min，時(shí)間為20～40min；

優(yōu)選地，步驟(1)所述調(diào)節(jié)pH為將pH調(diào)節(jié)至4.0～6.9；

優(yōu)選地，步驟(1)所述平衡緩沖液包含1～50mmol/L的檸檬酸鈉；

優(yōu)選地，步驟(1)所述平衡緩沖液的pH值為4.0～6.9。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述陽離子交換層析柱使用的陽離子交換層析介質(zhì)包括CM QZT 6FF、SP QZT 6FF、CM QZT XL、SP QZT XL、CMSepharose Fast Flow、SP Sepharose Fast Flow、SP Sepharose XL或Capto S中的任意一種或至少兩種的組合；

優(yōu)選地，所述陽離子交換層析介質(zhì)的使用量與流穿液的體積比為1:(2～40)；

優(yōu)選地，步驟(2)所述層析時(shí)液體的流速60～240cm/h；

優(yōu)選地，步驟(2)所述陽離子交換層析柱在使用前還包括使用平衡液1進(jìn)行處理的步驟；

優(yōu)選地，所述平衡液1包括1～50mmol/L的檸檬酸鈉；

優(yōu)選地，所述平衡液1的pH為4.0～6.9，優(yōu)選為6.0；

優(yōu)選地，步驟(2)收集流穿液后還包括使用陽離子層析洗脫緩沖液進(jìn)行洗脫的步驟；

優(yōu)選地，所述陽離子層析洗脫緩沖液包括1～50mmol/L的檸檬酸鈉和0.1～1.0mol/L的氯化鈉；

優(yōu)選地，所述陽離子層析洗脫緩沖液的pH為4.0～6.9，優(yōu)選為6.0；

優(yōu)選地，步驟(2)所述陽離子交換層析柱在使用后還包括使用洗滌液1和洗滌液2進(jìn)行交替洗滌的步驟；

優(yōu)選地，所述洗滌液1包括1～50mmol/L的檸檬酸鈉和0.5～2.0mol/L的氯化鈉；

優(yōu)選地，所述洗滌液2包括0.1～0.5mol/L氫氧化鈉水溶液。