[發明專利]一種促進頭發生長和防治脫發的木脂素化合物及其應用

在審

• 申請號: 202011494548.8
• 申請日: 2020-12-17
• 公開（公告）號: CN112592952A
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 李吉;鄧智利;周應軍
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12N5/071;A61K31/05;A61P17/14
• 代理公司: 重慶金橙專利代理事務所(普通合伙) 50273
• 代理人: 李梅

1.一種促進頭發生長和防治脫發的木脂素化合物，其特征在于，包括以下步驟：

S1、材料準備；

S2、人毛囊的分離培養；

S3、分離培養hDPC；

S4、MTS分析；

S5、總RNA分離、cDNA合成和實時PCR；

S6、免疫印跡試驗；

S7、統計分析。

2.根據權利要求1所述的一種促進頭發生長和防治脫發的木脂素化合物，其特征在于，所述步驟S1、材料準備中，天然化合物木脂素-1。

3.根據權利要求1所述的一種促進頭發生長和防治脫發的木脂素化合物，其特征在于，所述步驟S2、人毛囊的分離培養中，包括以下步驟：

S201、從雄激素性脫發患者的頭發移植手術中，分離非脫發部位的毛囊；

S202、用剪刀和鑷子在光學顯微鏡下去除毛囊周圍的脂肪組織，并在William’s E培養基中培養14天，輔以10mg/mL胰島素、2mM的L-谷氨酰胺、10ng/ml氫化可的松和100U/mL鏈霉素，在37℃、5％CO2細胞培養箱中培養；

S203、毛囊用VB1在William’s E培養基中孵育，每隔48h，浸泡在37℃的PBS中拍照；

S204、在所有實驗中，VB-1培養基每隔一天換一次新鮮培養基，從三個不同的志愿者中共分離出150個處于生長期毛囊，并用不同濃度的VB-1進行培養，實驗重復5次，每個濃度組重復6次。

4.根據權利要求1所述的一種促進頭發生長和防治脫發的木脂素化合物，其特征在于，所述步驟S3、分離培養hDPC中，包括以下步驟：

S301、在Dulbecco改良的Eagle培養基中添加10％(v/v)胎牛血清、100U/mL青霉素和100mg/mL鏈霉素，培養分離的hDPC；

S302、培養基每2天更換一次；

S303、細胞融合度到80-90％的時候，用0.25％(w/v)胰蛋白酶-EDTA收獲hDPCs，以1：3的比例傳代，此項研究中使用3-5代細胞。

5.根據權利要求1所述的一種促進頭發生長和防治脫發的木脂素化合物，其特征在于，所述步驟S4、MTS分析中，包括以下步驟：

S401、將細胞鋪于96孔培養皿中，4h后，加入MTS工作液20ul/孔，搖勻混合；

S402、將96孔板置于37℃、5％CO2培養箱中孵育1h，在隨后的12h、24h、48h和72h時間點記錄OD490nm值。

6.根據權利要求1所述的一種促進頭發生長和防治脫發的木脂素化合物，其特征在于，所述步驟S7、統計分析中，包括以下步驟：統計分析使用GraphPadPrism7.0軟件，并使用t-test檢驗。

7.根據權利要求1-6任一項所述的一種促進頭發生長和防治脫發的木脂素化合物在頭發再生中的應用。