[發明專利]與大口黑鱸食欲抑制相關的SNPs位點及應用

有效

• 申請號: 202011488730.2
• 申請日: 2020-12-16
• 公開（公告）號: CN112626227B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 胡婕;孫承熙;葉星
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院珠江水產研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京久維律師事務所 11582
• 代理人: 邢江峰

1.一種大口黑鱸POMC基因中與易攝食配方飼料性狀相關的SNPs分子標記，其特征在于，所述SNPs分子標記位于POMC基因序列的ORF區，所述POMC基因序列如SEQ ID NO:1所示；

所述大口黑鱸POMC基因的cDNA全長1828bp，包括96bp的5'非翻譯區，1,075bp的3'UTR和657bp的ORF，由三個外顯子組成；所述SNPs分子標記為4個，分別位于POMC基因完整ORF第220bp、第327bp、第452bp和第504bp處，其核苷酸多態性分別為TC、GA、CT和TC；

所述SNPs分子標記緊密連鎖構成三種POMC基因型，所述POMC基因型為：純合子220TT/327GG/452CC/504TT、220CC/327AA/452TT/504CC，和雜合子220CT/327AG/452CT/504CT，其中220TT/327GG/452CC/504TT為大口黑鱸群體中適合以配方飼料養殖的優勢基因型。

2.檢測權利要求1所述SNPs分子標記的引物對在制備用于大口黑鱸易攝食配方飼料群體選育試劑盒中的用途；

所述引物對為引物對1或引物對2；

所述引物對1為：

ACTH-F1：ATGTGTCCTGTGTGGCTATTGG，

ACTH-R1：GCAGCGATTTTGTTTCTCAT；

所述引物對2為：

ACTH-F2：GCTCTGTCACTCTGACCTCA，

ACTH-R2：CCTCCCTCACTCACTTCTGC。

3.一種用于POMC基因的基因分型的HRM檢測方法，其特征在于，所述HRM檢測方法的步驟如下：

使用TIANamp海洋動物DNA試劑盒從10–20mg的魚鰭組織中提取總DNA；

分別使用1.5％瓊脂糖凝膠電泳和多功能酶標儀確定DNA的質量和濃度；

根據HRM分析試劑盒的實驗流程，一個20μl反應的PCR混合物包括10μL 2×HRMAnalysis PreMix，6.8μL RNase-Free ddH₂O，0.6μL 10μM正向引物，0.6μL 10μM反向引物和2μL DNA模板；

兩步PCR反應條件為：在95℃下預變性兩分鐘；95℃變性10秒，57℃下退火并延伸30秒，40個循環；

連續熒光檢測可將斜率增量提高到0.05℃/s；

將溫度漂移應用于所有數據，并將所有熔解曲線歸一化為特定的強度閾值；

并使用CFX96 Real-Time PCR儀和軟件在65-95℃的范圍內產生熔解曲線并進行分析；

所述正向引物為：

Pgene-F3：GAGCATTTCCGCTGGGGG；

所述反向引物為：

Pgene-R3：CGTCGTTAGAGCTGTAGACTT。

4.權利要求1所述的SNPs分子標記在作為大口黑鱸易攝食配合飼料育種候選遺傳標記中的應用，其特征在于，選育基因型為220TT/327GG/452CC/504TT的大口黑鱸群體。