[發明專利]一種基因治療載體及其用途

有效

• 申請號: 202011486921.5
• 申請日: 2020-12-16
• 公開（公告）號: CN112522321B
• 公開（公告）日: 2022-04-08
• 發明（設計）人: 魯薪安;何霆;齊菲菲;劉光華;胡雪蓮
• 申請（專利權）人: 北京藝妙神州醫藥科技有限公司;北京藝妙醫療科技有限公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N15/12;C12N5/10;A61K48/00;A61K38/17;A61P25/00;A61P25/28;A61P25/14
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 張擁;張廣育

1.一種基因治療載體，其包括：

a）5′LTR；

b）Psi(ψ)包裝信號；

c）逆轉錄病毒輸出元件；

d）中心多嘌呤區/中央終止序列；

e）與編碼集落刺激因子1受體多肽的多核苷酸可操作地連接的啟動子；

f）編碼集落刺激因子1受體多肽的多核苷酸；

g）轉錄后調控元件；以及

h）3′LTR。

2.根據權利要求1所述的基因治療載體，其中，所述基因治療載體為γ逆轉錄病毒載體、腺關聯病毒載體、腺病毒載體或皰疹病毒載體。

3.根據權利要求1所述的基因治療載體，其中，所述基因治療載體為慢病毒載體。

4.根據權利要求3所述的基因治療載體，其中，所述慢病毒選自以下：人類免疫缺陷病毒、維斯納-梅迪病毒、山羊關節炎-腦炎病毒、馬傳染性貧血病毒、貓免疫缺陷病毒、牛免疫缺陷病毒或猿猴免疫缺陷病毒。

5.根據權利要求4所述的基因治療載體，其中，所述慢病毒為人類免疫缺陷病毒。

6.根據權利要求1或2所述的基因治療載體，其中，還包括編碼表達標簽的核苷酸序列。

7.根據權利要求6所述的基因治療載體，其中，所述表達標簽為截短的表皮生長因子受體、螢火蟲熒光素酶、增強的綠色熒光蛋白、鏈霉親和素結合肽標簽或Flag標簽。

8.根據權利要求1或2所述的基因治療載體，其中，所述5′LTR的啟動子由選自以下的異源啟動子替換：巨細胞病毒啟動子、勞斯肉瘤病毒啟動子或猿猴病毒40啟動子。

9.根據權利要求1或2所述的基因治療載體，其中，所述3′LTR包括一個或多個修飾。

10.根據權利要求9所述的基因治療載體，其中，所述3′LTR包括防止病毒轉錄超出第一輪病毒復制的一個或多個缺失。

11.根據權利要求10所述的基因治療載體，其中，所述3′LTR包括3′LTR的U3區域中TATA框以及Sp1和NF-κB轉錄因子結合位點的缺失。

12.根據權利要求11所述的基因治療載體，其中，所述3′LTR是自身失活LTR。

13.根據權利要求1或2所述的基因治療載體，其中，所述與編碼集落刺激因子1受體多肽的多核苷酸可操作地連接的啟動子包括：短延伸因子1α啟動子或其轉錄活性片段、骨髓增生性肉瘤病毒增強子陰性對照區域缺失并且dl587rev引物結合位點取代的啟動子或其轉錄活性片段。

14.根據權利要求1或2所述的基因治療載體，其中，所述與編碼集落刺激因子1受體多肽的多核苷酸可操作地連接的啟動子選自以下：跨膜蛋白119、整合素亞單元αM、CD45、離子鈣結合銜接分子1、C-X3-C基序趨化因子受體1、粘附G蛋白偶聯受體E1、CD68或CD40。

15.根據權利要求1或2所述的基因治療載體，其中，所述轉錄后調控元件包括土撥鼠肝炎病毒轉錄后調控元件。

16.根據權利要求1或2所述的基因治療載體，其中，所述集落刺激因子1受體多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示。

17.根據權利要求1或2所述的基因治療載體，其中，所述編碼集落刺激因子1受體多肽的多核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

18.根據權利要求17所述的基因治療載體，其中，所述編碼集落刺激因子1受體多肽的多核苷酸是經過密碼子優化的表達序列，如SEQ ID NO：4所示。