[發(fā)明專利]一種新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)、應(yīng)用和構(gòu)建枯草芽孢桿菌插入突變株文庫(kù)在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202011484796.4 | 申請(qǐng)日： | 2020-12-16 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN112553237A | 公開(kāi)（公告）日： | 2021-03-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 楊洪江;李東航;張志強(qiáng);龐文靜;秦旭穎 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 天津科技大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N15/75 | 分類號(hào)： | C12N15/75;C12N15/65;C12N15/54;C12N1/21;C12R1/125 |
| 代理公司： | 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12209 | 代理人： | 韓曉梅 |
| 地址： | 300457 天津市濱*** | 國(guó)省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 新型 mariner 座子 系統(tǒng) 應(yīng)用 構(gòu)建 枯草 芽孢 桿菌 插入 突變 文庫(kù) | ||
1.一種新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，其特征在于：所述系統(tǒng)包含如下元件：
⑴已測(cè)序的mariner轉(zhuǎn)座子，該轉(zhuǎn)座子GenBank序列接收號(hào)為KJ933396；
⑵額外添加在步驟⑴中已測(cè)序的mariner轉(zhuǎn)座子的ITR區(qū)域中的壯觀霉素抗性基因spc；
⑶能在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的宿主復(fù)制起始區(qū)；
⑷能在枯草芽孢桿菌細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的溫度敏感性質(zhì)粒復(fù)制起始區(qū)；
⑸溫度敏感性質(zhì)粒的載體耐藥性基因ermC。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，其特征在于：所述溫度敏感性質(zhì)粒復(fù)制起始區(qū)擴(kuò)增于pE194質(zhì)粒的溫敏復(fù)制起始區(qū)pE194 orits，能夠使質(zhì)粒在枯草芽孢桿菌細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，當(dāng)培養(yǎng)溫度超過(guò)42℃時(shí)，質(zhì)粒丟失。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，其特征在于：所述能在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)復(fù)制的宿主復(fù)制起始區(qū)擴(kuò)增于pBR322質(zhì)粒的復(fù)制起始區(qū)colE1 origin，能夠使所述新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)在大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)復(fù)制。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，其特征在于：所述已測(cè)序的mariner轉(zhuǎn)座子擴(kuò)增于pKKma質(zhì)粒，包括轉(zhuǎn)座酶基因tnpA，并在受轉(zhuǎn)座酶識(shí)別的兩個(gè)反向重復(fù)序列ITRs區(qū)域中額外添加了壯觀霉素抗性基因spc。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，其特征在于：所述溫度敏感性質(zhì)粒的載體耐藥性基因ermC來(lái)源于pMAD質(zhì)粒。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，其特征在于：所述新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)的元件的插入具有隨機(jī)性，將新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)命名為pZQ1902。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，其特征在于：所述已測(cè)序的mariner轉(zhuǎn)座子的核苷酸序列為SEQ ID NO.1。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)，其特征在于：所述新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)的核苷酸序列為SEQ ID NO.2。
9.如權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)在枯草芽孢桿菌插入突變株文庫(kù)的構(gòu)建方面中的應(yīng)用。
10.利用如權(quán)利要求1至8任一項(xiàng)所述的新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)構(gòu)建獲得的枯草芽孢桿菌插入突變株文庫(kù)，其特征在于：構(gòu)建步驟如下：
將新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)在大腸桿菌DH5α中構(gòu)建成功后，轉(zhuǎn)化到枯草芽孢桿菌中，培養(yǎng)含有新型mariner轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)的枯草芽孢桿菌，獲得轉(zhuǎn)化子30℃擴(kuò)增培養(yǎng)后，得到枯草芽孢桿菌插入突變株文庫(kù)。
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