[發(fā)明專利]一種紫菜赤腐病腐霉病原的鑒別檢測(cè)方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202011483053.5 | 申請(qǐng)日： | 2020-12-16 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN112646912B | 公開(kāi)（公告）日： | 2022-11-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 莫照蘭;茅云翔;何禮娟;李杰;李貴陽(yáng);楊慧超;唐磊 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國(guó)海洋大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6895 | 分類號(hào)： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京和信華成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11390 | 代理人： | 胡劍輝 |
| 地址： | 266100 山*** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 紫菜 赤腐病腐霉 病原 鑒別 檢測(cè) 方法 | ||
1.一種紫菜赤腐病腐霉病原的鑒別檢測(cè)方法，其特征在于，兩種特異性、高靈敏度引物序列的設(shè)計(jì)與檢測(cè)方法的建立：
其中，一種紫菜赤腐病腐霉病原菌Pythium porphyrae鑒定引物序列為P-for：CCTACAGCAATCCACGAGACTC；P-rev：TGCCGTAGAGAAGAACACAGAGA；
另一種紫菜赤腐病腐霉病原菌Pythium chondricola鑒定引物序列為C-for：CGGACACGAAGACGACGCTAT；C-rev：CGACTACGACTACGACTACGACTAT。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫菜赤腐病腐霉病原的鑒別檢測(cè)方法，其特征在于，所述引物序列根據(jù)P.porphyrae和P.chondricola基因組差異序列設(shè)計(jì)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種紫菜赤腐病腐霉病原的鑒別檢測(cè)方法，其特征在于，所述腐霉病原鑒定方法采用單重PCR檢測(cè)，反應(yīng)條件為：預(yù)變性95℃5min；變性95℃30s，退火55-61℃40s，延伸72℃1min，共35個(gè)循環(huán)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫菜赤腐病腐霉病原的鑒別檢測(cè)方法，其特征在于，所述紫菜赤腐病腐霉病原檢測(cè)方法為雙重PCR檢測(cè)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的紫菜赤腐病腐霉病原的鑒別檢測(cè)方法，其特征在于，所述雙重PCR檢測(cè)反應(yīng)條件為：25μL PCR反應(yīng)體系，2×Ex Taq Mix 12.5μL，兩對(duì)正反引物各0.4μM，模板拷貝數(shù)105標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的紫菜赤腐病腐霉病原的鑒別檢測(cè)方法，其特征在于，所述雙重PCR檢測(cè)時(shí)，兩對(duì)特異性引物比例在1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1時(shí)均得到兩條條帶，且最佳配比介于1:1至2:1。
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