[發(fā)明專利]一種定性檢測(cè)HLA-B*1502等位基因的試劑盒及方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011481756.4
• 申請(qǐng)日: 2020-12-16
• 公開（公告）號(hào): CN113151435A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁佳女;鄭宜文;安迪;于歡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州百邁生物股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測(cè)HLA-B*1502等位基因的試劑盒，其特征在于，包括檢測(cè)HLA-B*1502的上游引物SEQ ID NO.1、下游SEQ ID NO.2和探針SEQ ID NO.3，所述序列分別是：

SEQ ID NO.1：CGCGAGTCCGAGGATAGC

SEQ ID NO.2：GTTGTAGTACCGCGCAGGT

SEQ ID NO.3：CCGGAACACACAGATCTCC。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，還包括檢測(cè)HLA-B*1502特異性的上游引物SEQ ID NO.4，下游引物SEQ ID NO.5和探針SEQ ID NO.6，所述序列分別是：

SEQ ID NO.4：TGTCACATCATCAAGAGGA

SEQ ID NO.5：TGATCTGAGCCGCCGTGT

SEQ ID NO.6：TCCGCGGGTATGACCAGTCCGCCTA。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，還包括內(nèi)控檢測(cè)上游引物SEQID NO.7、下游引物SEQ ID NO.8和探針SEQ D NO.9，所述序列分別是：SEQ ID NO.7：TTGTGGGCTGTAATCATCGTCTA

SEQ ID NO.8：GTTCTCTTTCACTGACATCTGCAAA

SEQ ID NO.9：CCCACACAAATCTCTCCCTGGCATTG。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3之一所述的試劑盒，其特征在于，探針核酸序列5’采用FAM、TET、VIC、HEX和ROX中的一種修飾，探針核酸序列3’采用MGB、TAMRA、BHQ1基團(tuán)中的一種修飾。

5.一種檢測(cè)HLA-B*1502基因多態(tài)性的方法，包括如下步驟：

步驟1：對(duì)臨床樣本血液樣本進(jìn)行簡(jiǎn)單預(yù)處理，獲得血液預(yù)處理樣本；

步驟2：將步驟1中的血液預(yù)處理樣本與檢測(cè)HLA-B*1502基因多態(tài)性的PCR反應(yīng)試劑混勻，混勻后按預(yù)先設(shè)定的PCR反應(yīng)程序進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

步驟3：結(jié)果判讀；

所述基因多態(tài)性的PCR反應(yīng)試劑包括檢測(cè)HLA-B*1502的上游引物SEQ ID NO.1、下游SEQ ID NO.2和探針SEQ ID NO.3，所述序列分別是：

SEQ ID NO.1：CGCGAGTCCGAGGATAGC

SEQ ID NO.2：GTTGTAGTACCGCGCAGGT

SEQ ID NO.3：CCGGAACACACAGATCTCC。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述基因多態(tài)性的PCR反應(yīng)試劑還包括區(qū)分HLA-B*1502特異性的上游引物SEQ ID NO.4，下游引物SEQ ID NO.5和探針SEQ ID NO.6，所述序列分別是：

SEQ ID NO.4：TGTCACATCATCAAGAGGA

SEQ ID NO.5：TGATCTGAGCCGCCGTGT

SEQ ID NO.6：TCCGCGGGTATGACCAGTCCGCCTA。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述結(jié)果判讀的陽性結(jié)果為檢測(cè)通道CT值≤35，特異性位點(diǎn)檢測(cè)通道CT值≤35且內(nèi)參CT值≤35，則HLA-B*1502基因檢測(cè)為陽性。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，陽性對(duì)照品CT≤35，陰性對(duì)照品CT＞35或?yàn)閁ndet.，則HLA-B*1502基因檢測(cè)為陽性。