[發(fā)明專利]一種抑制HIS1基因表達(dá)的RNAi植物表達(dá)載體及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011475241.3
• 申請日: 2020-12-14
• 公開（公告）號: CN112575028A
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 歐陽超;林師;趙惠敏;陳思蘭;陳欣妍;安保光;曾翔;吳永忠;黃培勁
• 申請（專利權(quán)）人: 海南波蓮水稻基因科技有限公司
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;C12N15/66;C12N15/65;A01H5/00;A01H6/46
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 陳征

1.一種抑制HPPD抑制劑敏感型1基因表達(dá)的RNAi植物表達(dá)載體，其特征在于，含有發(fā)卡結(jié)構(gòu)表達(dá)盒，其中所述發(fā)卡結(jié)構(gòu)表達(dá)盒含有由SEQ ID No.1-3所示的DNA片段所形成的發(fā)卡結(jié)構(gòu)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的RNAi植物表達(dá)載體，其特征在于，所述發(fā)卡結(jié)構(gòu)表達(dá)盒的啟動子為水稻或玉米的Ubi啟動子、Rubisco小亞基啟動子、Cab啟動子、CAMV 35S啟動子或Actin啟動子中的一種；優(yōu)選地，啟動子為水稻或玉米的Ubi啟動子。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的RNAi植物表達(dá)載體，其特征在于，還包括選擇標(biāo)記表達(dá)盒，所述選擇標(biāo)記表達(dá)盒含有啟動子、標(biāo)記基因和終止子，其中所述啟動子為水稻或玉米的Ubi啟動子、CAMV 35S啟動子，或Actin啟動子；所述標(biāo)記基因為可產(chǎn)生顏色變化的酶的基因、熒光標(biāo)記基因、抗生素標(biāo)記基因、除草劑篩選標(biāo)記基因或抗化學(xué)試劑標(biāo)記基因，所述終止子為NOS終止子或Ubi終止子。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項所述的RNAi植物表達(dá)載體，其特征在于，具有SEQ IDNo.4所示的核苷酸序列。

5.含有權(quán)利要求1-4任一所述的RNAi植物表達(dá)載體的生物材料，所述生物材料為工程菌、細(xì)胞、愈傷組織、植株、種子。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的RNAi植物表達(dá)載體的構(gòu)建方法，包括將SEQ ID No.1-3所示的DNA片段用overlapping方法連接到植物雙元轉(zhuǎn)化載體上。

7.一種干擾植物HPPD抑制劑敏感型1基因HIS1表達(dá)的方法，其特征在于，使用權(quán)利要求1-4任一所述的RNAi植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化植物。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，包括：

(1)構(gòu)建RNAi植物表達(dá)載體：將SEQ ID No.1-3所示的DNA片段用overlapping方法連接到植物雙元轉(zhuǎn)化載體pTCK303的SacⅠ和BamHⅠ位點間，得到RNAi植物表達(dá)載體pTCK303-HIS1i-3；

(2)轉(zhuǎn)化：將pTCK303-HIS1i-3導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105菌株，并轉(zhuǎn)化愈傷組織，將轉(zhuǎn)化后的愈傷組織進(jìn)行誘導(dǎo)分化獲得除草劑顯性敏感植物。

9.權(quán)利要求1-4中任一所述的RNAi植物表達(dá)載體在干擾植物HIS1基因表達(dá)、制備三酮類除草劑顯性敏感植物中的應(yīng)用。

10.權(quán)利要求1-4任一所述的RNAi植物表達(dá)載體在培育轉(zhuǎn)基因新品種、雜交水稻制種或防止轉(zhuǎn)基因逃逸中的應(yīng)用。