[發(fā)明專利]鐮刀霉屬植物內(nèi)生微生物中分離出的羥基苯乙酸酯化物及其分離方法和應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011473807.9
• 申請(qǐng)日: 2020-12-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112457196A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盧軒;馮寶民;孫業(yè)青;唐川;秦海宏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 大連大學(xué)
• 主分類號(hào): C07C69/732
• 分類號(hào): C07C69/732;C07C67/48;A01N37/38;A01P13/00;C12P7/62;C12N1/14;C12R1/77
• 代理公司: 大連智高專利事務(wù)所(特殊普通合伙) 21235
• 代理人: 胡景波

鐮刀霉屬植物內(nèi)生微生物中分離出的羥基苯乙酸酯化物及其分離方法和應(yīng)用，屬于生物農(nóng)藥領(lǐng)域。本發(fā)明從采集自長(zhǎng)白紅景天葉片部位的內(nèi)生鐮刀霉屬微生物的固體發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到三個(gè)新型羥基苯乙酸酯化物。本發(fā)明的原料為植物內(nèi)生微生物發(fā)酵產(chǎn)物，安全易得，方法簡(jiǎn)單易操作，不引入有毒物質(zhì)，成本低廉，可大規(guī)模持續(xù)開(kāi)發(fā)利用。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物農(nóng)藥領(lǐng)域，具體涉及鐮刀霉屬植物內(nèi)生微生物中分離出的羥基苯乙酸酯化物及其分離方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

目前從微生物代謝產(chǎn)物中分離得到50000種以上的天然產(chǎn)物，其中多種化合物生物活性良好，具有被開(kāi)發(fā)成為生物農(nóng)藥的潛質(zhì)。隨著研究的深入，從傳統(tǒng)陸生微生物代謝產(chǎn)物中獲得新型先導(dǎo)化合物的概率逐漸降低，速度逐年減緩，故開(kāi)發(fā)特境微生物資源成為當(dāng)務(wù)之急。植物內(nèi)生微生物由于其生境特殊，能夠代謝產(chǎn)生結(jié)構(gòu)特殊，活性良好的化合物，是目前的研究熱點(diǎn)之一。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及從采集自長(zhǎng)白紅景天葉片部位的內(nèi)生鐮刀霉屬微生物的固體發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到三種羥基苯乙酸酯化物，該類化合物對(duì)單子葉雜草野燕麥、早熟禾、稗草、馬唐等有明顯的抑制活性，對(duì)雙子葉植物苜蓿，大豆等無(wú)明顯抑制作用。

本發(fā)明分離出三種羥基苯乙酸酯化物，三種羥基苯乙酸酯化物的分子結(jié)構(gòu)式如下：

化合物1為4′-羥基苯乙酸-2、3-丁二醇-2-酯，化合物2為3′，4′-二羥基苯乙酸-2、3-丁二醇-2-酯，化合物3為4′-羥基苯乙酸-3-甲基-1,3-丁二醇-1-酯。

本發(fā)明同時(shí)保護(hù)鐮刀霉屬植物內(nèi)生微生物中分離出的羥基苯乙酸酯化物的分離方法，具體步驟如下：

(1)將采集自長(zhǎng)白紅景天葉片部位的內(nèi)生鐮刀霉屬真菌接種于培養(yǎng)基發(fā)酵液的錐形瓶中搖床震蕩培養(yǎng)2天，再將震蕩培養(yǎng)后的發(fā)酵液連同菌絲按接種量10％的比例體接種于裝有固體培養(yǎng)基的錐形瓶中靜止發(fā)酵培養(yǎng)40天，培養(yǎng)溫度為28攝氏度。其中固體培養(yǎng)基為大米和純凈水。

(2)代謝產(chǎn)物的提取：使用等體積丙酮對(duì)植物內(nèi)生真菌固體發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行超聲提取，提取3次，每次15分鐘后經(jīng)8層紗布過(guò)濾，將提取液與菌絲體及大米分離，提取液濃縮至干，加水將提取浸膏混懸，使用等體積乙酸乙酯溶液萃取3次，將萃取液減壓回收有機(jī)溶劑得到乙酸乙酯層代謝產(chǎn)物。

(3)乙酸乙酯層用正相硅膠柱色譜分離純化，采用二氯甲烷：甲醇(100︰0-0︰100)進(jìn)行梯度洗脫，得到各梯度洗脫流份。

(4)步驟(3)的洗脫液經(jīng)高效液相色譜分離純化，通過(guò)(4)20％-95％甲醇水梯度洗脫，210nm，保留時(shí)間28min不純有雜質(zhì)，用30％乙腈水純化得化合物1；通過(guò)20％-95％甲醇水梯度洗脫，210nm，保留時(shí)間24min不純有雜質(zhì)，用23％乙腈水純化得化合物2；20％-95％甲醇水梯度洗脫，210nm，保留時(shí)間35min得化合物3。

本發(fā)明同時(shí)保護(hù)鐮刀霉屬植物內(nèi)生微生物中分離出的羥基苯乙酸酯化物在生物農(nóng)藥方面的應(yīng)用。

有益效果：本發(fā)明的原料為植物內(nèi)生微生物發(fā)酵產(chǎn)物，安全易得，方法簡(jiǎn)單易操作，不引入有毒物質(zhì)，成本低廉，可大規(guī)模持續(xù)開(kāi)發(fā)利用。在生物農(nóng)藥研究開(kāi)發(fā)上具有非常重要的意義。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。

實(shí)施例1

(1)將采集自長(zhǎng)白紅景天葉片部位的內(nèi)生鐮刀霉屬真菌進(jìn)行固體發(fā)酵。

固體培養(yǎng)基配方：大米80g，哇哈哈純凈水120ml。