[發(fā)明專利]鐮刀霉屬植物內(nèi)生微生物中分離出的羥基苯乙酸酯化物及其分離方法和應(yīng)用

在審

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• 申請日: 2020-12-15
• 公開（公告）號: CN112457196A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盧軒;馮寶民;孫業(yè)青;唐川;秦海宏
• 申請（專利權(quán)）人: 大連大學(xué)
• 主分類號: C07C69/732
• 分類號: C07C69/732;C07C67/48;A01N37/38;A01P13/00;C12P7/62;C12N1/14;C12R1/77
• 代理公司: 大連智高專利事務(wù)所(特殊普通合伙) 21235
• 代理人: 胡景波

1.鐮刀霉屬植物內(nèi)生微生物中分離出的羥基苯乙酸酯化物，其特征在于，鐮刀霉屬植物內(nèi)生微生物中分離出的羥基苯乙酸酯化物為化合物1、化合物2和化合物3，三種化合物的分子結(jié)構(gòu)式如下：

其中化合物1為4′-羥基苯乙酸-2、3-丁二醇-2-酯，化合物2為3′，4′-二羥基苯乙酸-2、3-丁二醇-2-酯，化合物3為4′-羥基苯乙酸-3-甲基-1,3-丁二醇-1-酯。

2.權(quán)利要求1中鐮刀霉屬植物內(nèi)生微生物中分離出的羥基苯乙酸酯化物的分離方法，其特征在于，具體步驟如下：

S1.將采集自長白紅景天葉片部位的內(nèi)生鐮刀霉屬真菌接種于培養(yǎng)基發(fā)酵液的錐形瓶中搖床震蕩培養(yǎng)2天，再將震蕩培養(yǎng)后的發(fā)酵液連同菌絲按接種量10％的比例體接種于裝有固體培養(yǎng)基的錐形瓶中靜止發(fā)酵培養(yǎng)40天，培養(yǎng)溫度為28攝氏度，其中固體培養(yǎng)基為大米和純凈水；

S2.代謝產(chǎn)物的提取：使用等體積丙酮對植物內(nèi)生真菌固體發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行超聲提取，經(jīng)紗布過濾，將提取液與菌絲體及大米分離，提取液濃縮至干，加水將提取浸膏混懸，使用乙酸乙酯溶液萃取，將萃取液減壓回收有機(jī)溶劑得到乙酸乙酯層代謝產(chǎn)物；

S3.乙酸乙酯層用正相硅膠柱色譜分離純化，采用二氯甲烷：甲醇100︰0-0︰100進(jìn)行梯度洗脫，得到各梯度洗脫流份；

S4.步驟S3的洗脫液經(jīng)高效液相色譜分離純化，得化合物1、化合物2和化合物3。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鐮刀霉屬植物內(nèi)生微生物中分離出的羥基苯乙酸酯化物的分離方法，其特征在于，步驟S2中乙酸乙酯的加入量與混懸液體積相同，萃取次數(shù)為3次。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的鐮刀霉屬植物內(nèi)生微生物中分離出的羥基苯乙酸酯化物的分離方法，其特征在于，步驟S4中洗脫液經(jīng)高效液相色譜分離純化，通過20％-95％甲醇水梯度洗脫，210nm，保留時(shí)間28min不純有雜質(zhì)，用30％乙腈水純化得化合物1；通過20％-95％甲醇水梯度洗脫，210nm，保留時(shí)間24min不純有雜質(zhì)，用23％乙腈水純化得化合物2；20％-95％甲醇水梯度洗脫，210nm，保留時(shí)間35min得化合物3。

5.權(quán)利要求1中鐮刀霉屬植物內(nèi)生微生物中分離出的羥基苯乙酸酯化物在生物農(nóng)藥方面的應(yīng)用。