[發(fā)明專利]一種抗Her2抗體的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011472883.8
• 申請日: 2020-12-15
• 公開（公告）號: CN112979806A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張國華;申陽陽;梁華斌;王龍超;李秀莉;胡桂珍;許可;王丹丹;徐明波
• 申請（專利權(quán)）人: 北京雙鷺生物技術(shù)有限公司;北京雙鷺藥業(yè)股份有限公司;北京雙鷺立生醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C07K1/22;C07K1/18;C07K1/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種抗Her2抗體的純化方法，其特征在于：將深層過濾后含有的抗Her2抗體的料液順序通過陰離子交換層析柱與proteinA親和層析層析柱串聯(lián)層析系統(tǒng)，使內(nèi)毒素、宿主蛋白結(jié)合到陰離子交換層析柱上，之后采用低pH緩沖液單獨對親和層析柱進行洗脫，收集洗脫后的目的蛋白；具體步驟如下：

（1）Her2細胞發(fā)酵液，經(jīng)深層過濾，得到表達上清；

（2）細胞表達上清，順序通過陰離子交換層析柱與proteinA親和層析層析柱串聯(lián)層析系統(tǒng)，使內(nèi)毒素、宿主蛋白結(jié)合到陰離子交換層析柱上，至上樣結(jié)束；

（3）采用低pH緩沖液單獨對親和層析柱進行洗脫，收集洗脫后的目的蛋白；

（4）洗脫后的目的蛋白經(jīng)過陽離子交換層析，得到高純度的蛋白樣品；

其中所屬步驟（2）中采用的陰離子交換層析為：、聚甲基丙烯酸脂類，配基為伯銨基或高流速瓊脂糖凝膠類，配基為N-芐基-N-甲基乙醇胺或陰離子復(fù)合膜；所述的低pH緩沖液為檸檬酸或甘氨酸，緩沖pH3.0~3.6，緩沖液濃度10mmol/L~100 mmol/L；

所述步驟（1）和步驟（2）中的陰離子交換層析柱與proteinA親和層析層析柱串聯(lián)層析上樣前，均采用pH6.5~7.5，濃度10mmol/L~100 mmol/L磷酸鹽緩沖液進行平衡。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗Her2抗體的純化方法，其特征在于：步驟（1）中的深層過濾為一級過濾，濾膜為pall公司的SC050PDH4濾膜。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗Her2抗體的純化方法，其特征在于串聯(lián)層析的條件為：180~300cm/h，柱高：15~20cm，平衡緩沖液為：pH6.5~7.5，濃度10mmol/L~100 mmol/L磷酸鹽緩沖液平衡。

4.權(quán)利要求1所述抗Her2抗體的純化方法，其特征在于陽離子交換層析條件為：200~400cm/h，柱高：15~20cm，平衡緩沖液為：pH5.0~5.5，濃度10mmol/L~100 mmol/L磷酸鹽或檸檬酸緩沖液，洗脫液：pH6.0~6.5，濃度10mmol/L~100 mmol/L磷酸鹽或醋酸鹽緩沖液，加氯化鈉100~300 mmol/L。